[发明专利]牛羊肠毒血症的D型产气荚膜梭菌类毒素疫苗的制备方法

摘要

本发明涉及一种牛羊肠毒血症的D型产气荚膜梭菌类毒素疫苗的制备方法，是利用D型产气荚膜梭菌菌种经过菌种复苏、增菌、培毒、灭活制备类毒素溶液；将类毒素溶液与白油佐剂乳化制得；使用时，对牛羊肌肉注射，每半年免疫一次，每次4ml,可有效的防止牛羊肠毒血症的发生。本发明根据该病的致病机理开发制备了效价全、免疫力强、针对性好、无毒副作用的D型产气荚膜梭菌类毒素疫苗，用于动物的D型产气荚膜梭菌病的预防，控制D型产气荚膜梭菌病的流行。

主权项

一种牛羊肠毒血症的D型产气荚膜梭菌类毒素疫苗的制备方法，其特征在于具体步骤如下:1)将D型产气荚膜梭菌菌种接种于5%绵羊血‑1%葡萄糖‑琼脂平板上，37℃厌氧培养36小时复苏；2）挑取复苏后的单个菌落接种于硫乙醇酸盐流体培养基FT45℃厌氧增菌10h；将FT增菌培养液按照接种量5%体积比接种厌氧肉肝汤，43℃厌氧培养6h；取厌氧肉肝汤菌液4℃10000r/min离心15min，蔡氏滤器过滤取上清得到毒素溶液；3）将毒素溶液用1M NaOH调pH至7.2，然后加入甲醛使毒素溶液中甲醛浓度达到0.3%，充分振荡混匀，置37℃96h灭活，间隔5‑6h振摇一次，即得类毒素溶液；4）将白油和Span‑80按照94：6的体积比混合，再加入白油和Span‑80混合液质量比2%的硬脂酸铝溶化混匀，121℃高压灭菌30分钟即为油相；取类毒素溶液，加入Tween‑80s使Tween‑80s在类毒素溶液中浓度达到2%,混匀，即为水相；将油相与水相按体积比1：1的比例乳化，乳化液中加入硫柳汞使硫柳汞终浓度为0.01%，即得牛羊肠毒血症的D型产气荚膜梭菌类毒素疫苗类毒素疫苗；所述5%绵羊血‑1%葡萄糖‑琼脂平板成分为：1克葡萄糖、3.8克豆粉琼脂、5毫升绵羊血和100毫升去离子水。