[发明专利]鸟巢蕨诱导绿色小球高频率植株再生方法

摘要

鸟巢蕨诱导绿色小球高频率植株再生方法，属于植物培养方法技术领域。本发明以鸟巢蕨无菌苗的顶生短茎为外植体材料，在附加苯基脲类细胞分裂素CPPU1.5~2.5mg/L和吲哚丁酸IBA0.1mg/L的MS改良培养基上诱导产生绿色小球，绿色小球的诱导频率达100%。在添加CPPU1.0~1.5mg/L和IBA0.1mg/L的MS改良培养基上进行绿色小球增殖，绿色小球每代增殖系数为5。在附加CPPU0.2~0.5mg/L和IBA0.1mg/L的MS改良培养基上绿色小球萌发形成幼苗。幼苗在附加IBA0.2~0.4mg/L的MS改良培养基上发育成具有根、茎、叶的完整小植株，成株率达95%以上。本方法适用于鸟巢蕨试管苗工厂化生产。

主权项

鸟巢蕨诱导绿色小球高频率植株再生方法，其特征在于：1） 材料选用鸟巢蕨无菌苗为材料；2） 培养基MS改良培养基由MS大量元素、MS微量元素与B5维生素组成，添加蔗糖30 g/L，活性炭质量比 0.1%，8 g/L的琼脂条作为固化剂；绿色小球诱导培养基：MS改良培养基附加苯基脲类细胞分裂素CPPU 1.5 ~ 2.5 mg/L和生长素IBA 0.1 mg/L；绿色小球增殖培养基：MS改良培养基附加苯基脲类细胞分裂素CPPU 1.0 ~ 1.5 mg/L和生长素IBA 0.1 mg/L；绿色小球萌发培养基：MS改良培养基附加苯基脲类细胞分裂素CPPU 0.2 ~ 0.5 mg/L和生长素IBA 0.1 mg/L；成苗和生根培养基：MS改良培养基附加生长素IBA 0.2 ~ 0.4 mg/L；上述各种培养基在高压灭菌前用氢氧化钠和盐酸调整pH值至5.8；3） 方法在超净工作台上取鸟巢蕨无菌苗的顶生短茎，接种在步骤2）所述绿色小球诱导培养基上，25 d在短茎的表面诱导产生出绿色小球；绿色小球转到步骤2）所述绿色小球增殖培养基上进行继代增殖培养，30 d为一个周期；经过继代增殖培养的绿色小球转移到步骤2）所述绿色小球萌发培养基上，20 d形成幼苗；在成苗和生根培养基上，幼苗发育成具有根、茎、叶的完整小植株；           绿色小球的诱导、增殖、萌发、成苗和生根培养均在光照条件下进行，光照强度为1500 lx，光照时间为12 h/d；培养室温度为26℃±2℃。