[发明专利]一种肿瘤标志物的检测方法

摘要

本发明涉及一种肿瘤标志物的检测方法，是基于SERS(表面增强拉曼散射)技术的免疫检测，首先在基底上固定抗体；然后加入抗原和偶联有抗体的拉曼探针，这样就在基底上形成了“固相抗体-待测抗原-标记抗体”三明治结构的免疫复合体；最后，对该免疫复合体进行SERS检测，即可高特异性的识别待测物的SERS信号。本发明被认为是一种具有良好发展前景的检测方法，该方法运用偶联有抗体的金属纳米粒作为SERS基底，可以实现高速、高敏感的检测。

主权项

一种肿瘤标记物的检测方法，其特征是，包括以下步骤：(1)首先需要制备具有anti‑XX PcAb‑4‑MBA‑HGNs结构的SERS探针。在加入多克隆抗体anti‑XX这一步，分别加入CA153和CA125抗体制成anti‑CA153PcAb‑4‑MBA‑HGNs和anti‑CA125PcAb‑4‑MBA‑HGNs两种SERS探针。实验开始之前，需事先准备若干SERS微流控芯片，其中F、G、H三条微通道底面上溅射有金纳米颗粒。对照品的准备。首先，关闭除A阀门以外的所有阀门，用微量注射泵将A通道注满双蒸水后关闭A阀门。然后，打开B阀门，用微量注射泵将B通道注满1％的BSA溶液后关闭B阀门。打开C阀门，用微量注射泵将C通道注满PBS溶液后关闭C阀门。最后，依次打开D、E两个阀门，用微量注射泵将与它们对应的通道依次注满anti‑CA153PcAb‑4‑MBA‑HGNs和anti‑CA125PcAb‑4‑MBA‑HGNs探针溶液后依次关闭D、E两个阀门。待测样品的准备。对上述几种待测样品，严格按照上述步骤进行实验操作。首先，开启微流控芯片上的F、G、H三个阀门，用微量注射泵从进液口向对应的3条通道内注射PBS缓冲液至充满，而后将0.008mol/L的EDC和0.012mol/L的NHS混合溶液(V：V＝1：1)从进液口以3.1mL/min的流速注射进入微通道对金基底活化30min。活化完成后再从进液口向通道中持续注入PBS溶液5min对微通道进行清洗，以清除残余的EDC/NHS溶液。(2)然后，依次打开F、G、H三个阀门，分别将10μg/mL的anti‑CA153、anti‑CA125和anti‑Ab抗体从进液口经15min分别注射入微通道，以使它们固定在微通道中经EDC/NHS溶液活化的金基底上。等anti‑XX McAbs抗体在金基底上固定好之后，经进液口向微通道注入1％的BSA溶液，以封闭F、G、H三个通道中未被特异性结合的羧基。封闭完成后再从进液口向通道中持续注入PBS溶液5min对F、G、H三个微通道进行清洗，以清除残余的EDC/NHS溶液。(3)第三步，依次打开F、G、H三个阀门，分别将50μg/mL的anti‑CA153、anti‑CA125和anti‑Ab抗原经进液口以1.0mL/min的速度分别注射入对应的微通道，随后将整个芯片培养30min。之后再从进液口向通道中持续注入PBS溶液5min对微通道进行清洗，以清除没有进行特异性结合的anti‑XX抗原。(4)最后，打开F、G、H三个阀门，将0.008μmol/L的anti‑CA153PcAb‑4‑MBA‑HGNs和anti‑CA125PcAb‑4‑MBA‑HGNs的混合液经进液口以3.1mL/min的流速注射进入微通道，以形成三明治结构的免疫复合物。这一步操作完成以后即可选取SERS微流控芯片微通道上的任意位置进行SERS检测，而后借助软件或人工对所得SERS信号光谱进行分析以实现对待测物质的定性、定量分析。