[发明专利]转导SV40LT抗原基因构建先天性心脏病室间隔缺损细胞模型及其细胞库在审
| 申请号： | 201310404102.5 | 申请日： | 2013-09-01 |
| 公开（公告）号： | CN104419672A | 公开（公告）日： | 2015-03-18 |
| 发明（设计）人： | 翁炳焕;黄荷凤;徐晨明;李晓;杨红卫;陈雁 | 申请（专利权）人： | 翁炳焕 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/85;C40B50/06;C40B40/02 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 317300 浙江省仙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明涉及用于医学研究领域的SV40LT抗原基因转导先天性心脏病室间隔缺损细胞模型及其细胞库的构建，其主要特征是按常规以T4DNA连接酶、BamHI、pcDNA3.1(-)DNA及SV40LTag DNA构建SV40LTag-pcDNA3.1(-)重组子，经感受态大肠杆菌纯化后导入经胶原酶II消化的离体传代、呈对数生长的先天性心脏病室间隔缺损细胞，使重组子与DNA整合，并扩大培养经G418筛选含阳性重组子的细胞克隆，筛选细胞形态、生长曲线、染色体核型、裸鼠致瘤试验、转染细胞SV40大T基因检测、mRNA产物测定及DNA序列测定结果符合永生化细胞特性并与原代细胞相同或相近者作为SV40LT转导先天性心脏病室间隔缺损体外研究细胞模型，为在体外从细胞水平长期研究其发病机制奠定基础。 | ||
| 搜索关键词： | 转导 sv40lt 抗原 基因 构建 先天性 心脏病 室间隔 缺损 细胞 模型 及其 | ||
【主权项】：
一种用于医学研究领域的转导SV40LT抗原基因构建先天性心脏病室间隔缺损细胞模型及其细胞库，其主要特征是按常规以T4DNA连接酶、BamHI、pcDNA3.1(‑)DNA及SV40LTagDNA构建SV40LTag‑pcDNA3.1(‑)重组子、以感受态大肠杆菌纯化重组子、以脂质体转染法将其导入经胶原酶II消化的离体传代或呈对数生长的先天性心脏病室间隔缺损组织细胞，使重组子与细胞的DNA整合，并扩大培养经G418筛选含阳性重组子的细胞克隆，筛选细胞形态、生长曲线、染色体核型、软琼脂集落生长、裸鼠致瘤试验、转染细胞DNA中SV40大T基因检测、mRNA表达产物测定及DNA序列测定结果符合永生化细胞特性并与原代细胞相同或相近者作为SV40LT抗原基因介导先天性心脏病室间隔缺损体外研究细胞模型(替代人体或动物直接试验)冻存于液氮中。
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