[发明专利]一种高效液相色谱检测血液中氯丙嗪含量的方法

摘要

本发明涉及生物医疗技术领域，提供了一种高效液相色谱检测血液中氯丙嗪含量的方法，包括配制1mg/ml的的氯丙嗪标准溶液、1mg/ml的的安定内标溶液、空白标样、正常人血液标样、病人血液标样，放入色谱仪里绘制色谱图，根据色谱图判断病人血液里面是否含有氯丙嗪；然后根据色谱图绘制氯丙嗪标准曲线，再将病人血液标样色谱图中的氯丙嗪峰值、安定内标溶液峰值与氯丙嗪标准曲线进行比较，计算出病人血液中的氯丙嗪含量。本发明有效解决了色谱图中杂峰多、灵敏度低、精确度低、成本高、绘制出的氯丙嗪标准曲线线性范围较小、过氧化物多影响氯丙嗪稳定提取的问题。

主权项

本发明的一种高效液相色谱检测血液中氯丙嗪含量的方法，其特征在于，包含以下步骤：第一步，配制lmg／ml的的氯丙嗪标准溶液；首先， 称取分析纯氯丙嗪500mg，放入500mL容量瓶中，然后将色谱纯甲醇倒入装有氯丙嗪的容量瓶中，稀释至500ml，摇匀； 第二步，配制1mg/ml的的安定内标溶液；首先，称取分析纯安定100mg，放入100mL容量瓶中，然后将去离子水倒入装有安定的容量瓶中，稀释至100ml，摇匀；第三步，配制17.6μg/ml维生素C；首先，称取维生素C1.76mg,放入100mL容量瓶中，将去离子水加入装有维生素C的容量瓶中，稀释至100ml，摇匀；第四步，配制2129.6ml流动相；首先将甲醇1400ml、冰醋酸5.2ml、四甲基乙二胺4.4ml25000ml的容量瓶中，然后向装有甲醇、冰醋酸、四甲基乙二胺的容量瓶中倒入720ml去离子水，摇匀；第五步，取500μl正常人的血清加入10ml具塞抽提管中，作为空白标样；第六步，取500μl正常人的血清加入10ml具塞抽提管中，然后量取150ng安定内标溶液，倒入装有正常人血清的具塞抽提管中，作为标样1；第七步，取500μl正常人的血清加入10ml具塞抽提管中，然后依次量取300ng氯丙嗪标准溶液，倒入装有正常人血清的具塞抽提管中，作为标样2；第八步，取500μl正常人的血清加入10ml具塞抽提管中，然后量取150ng安定内标溶液，分别与10ng、50ng、100ng、200ng、300ng、600ng氯丙嗪标准溶液，一起倒入装有病人血清的具塞抽提管中，作为标样3、4、5、6、7、8；第九步，取500μl病人的血清加入10ml具塞抽提管中，然后量取150ng安定内标溶液，倒入装有病人血清的具塞抽提管中，作为标样9；第十步，首先分别向空白标样、标样1、2、3、4、5、6、7、8、9中加入维生素C100μl，摇匀后再分别加入2mol/l氢氧化钠500μl，再加入色谱纯乙醚4.5ml，漩涡振荡3分钟，静置20分钟；第十一步，分别从离心后的空白标样、标样1、2、3、4、5、6、7、8、9中移取3.5ml上清液至10支洁净的10ml具塞抽提管中，放置于50℃下水浴，并在氮气流下蒸发至完全干燥； 第十二步，首先将取出的残留物分别用250μl流动相漩涡混匀、溶解，然后将溶解物分别吸入10支尖底离心管中；第十三步，分别从10支尖底离心管中取出100μl，放入10支试管中，再将10支试管放入色谱仪中进行光谱测量，得出10张色谱图；第十四步，根据空白标样、标样1、标样2、标样3的比较可以判断出环己烷羧酸内标溶液的峰值，氯丙嗪标准溶液的峰值；进一步地，根据标样3的色谱图可以判断出标样9中是否含有氯丙嗪；进一步地，色谱仪根据标样3、4、5、6、7、8的色谱图绘制氯丙嗪标准曲线；进一步地，色谱仪根据色谱图中氯丙嗪的峰值、安定内标溶液的峰值、氯丙嗪标准曲线，计算出标样9中氯丙嗪的含量。