[发明专利]米或米制品中是否含转基因水稻LLRICE62检测法

摘要

本发明公开了一种米或米制品中是否含有转基因水稻LLRICE62的检测法，以米或米制品为待测样品，以转基因稻米LLRICE62为阳性对照，以非转基因稻米或者非LLRICE62的转基因稻米为阴性对照；包括以下步骤：1）、设计耐除草剂转基因水稻LLRICE62的对应引物组； 2）、提取待测样品、阳性对照、阴性对照的DNA；3）、将步骤2）所得的待测样品的DNA、阳性对照的DNA、阴性对照的DNA分别利用步骤1）所得的引物组设置PCR反应体系进行扩增；4）、利用步骤3）所得的待测样品反应液、阳性对照反应液、阴性对照反应液进行比对，从而判定米或米制品中是否含有转基因水稻LLRICE62。

主权项

米或米制品中是否含有转基因水稻LLRICE62的检测法，其特征是：以米或米制品为待测样品，以转基因稻米LLRICE62为阳性对照，以非转基因稻米或者非LLRICE62的转基因稻米为阴性对照；包括以下步骤：1）、设计引物：设计耐除草剂转基因水稻LLRICE62的对应引物组；每套引物组由4条引物组成；4条引物中2条为内引物，另2条为外引物； 2）、提取待测样品、阳性对照、阴性对照的DNA；3）、核酸的恒温扩增：将步骤2）所得的待测样品的DNA、阳性对照的DNA、阴性对照的DNA分别利用步骤1）所得的每套引物组进行以下操作：①、步骤1）所得的每套引物组中的4条引物用DEPC处理水进行溶解稀释；②、设置扩增反应体系：PCR反应体系所述每条内引物在PCR反应体系中的浓度为7.5~8.5μmol/L；所述每条外引物在PCR反应体系中的浓度为0.8~1.2μmol/L；从而分别得待测样品反应体系、阳性对照反应体系、阴性对照反应体系；③、所述待测样品反应体系、阳性对照反应体系、阴性对照反应体系分别进行以下操作：于60~65℃扩增反应30~60分钟； 从而分别得待测样品反应液、阳性对照反应液、阴性对照反应液；4）、结果的判读：步骤3）所得的待测样品反应液、阳性对照反应液、阴性对照反应液分别按照以下任一方式进行操作： 方式①、一）、将步骤3）所得的待测样品反应液、阳性对照反应液、阴性对照反应液在可见光下直接用肉眼观察，比较待测样品反应液、阳性对照反应液、阴性对照反应液的混浊程度；当同时满足阴性对照反应液为澄清透明、且阳性对照反应液为白色混浊时，进入步骤二）；否则进入步骤三）；二）、进行样品的判定：当待测样品反应液为澄清透明时，则待测样品的检测结果为阴性；即，待测样品中不含有转基因水稻LLRICE62成分；当待测样品反应液为白色混浊时，则待测样品的检测结果为阳性；即，待测样品中含有转基因水稻LLRICE62成分；三）、检测失败，重新返回至步骤一）；方式②、一）、将步骤3）所得的待测样品反应液、阳性对照反应液、阴性对照反应液在紫外灯照射的状态下用肉眼观察，比较待测样品反应液、阳性对照反应液、阴性对照反应液的混浊程度；当同时满足阴性对照反应液为澄清透明、且阳性对照反应液出现肉眼可见的荧光时，进入步骤二），否则进入步骤三）；二）、进行样品的判定：当待测样品反应液为澄清透明时，则待测样品的检测结果为阴性；即，待测样品中不含有转基因水稻LLRICE62成分；当待测样品反应液出现肉眼可见的荧光时，则待测样品的检测结果为阳性；即，待测样品中含有转基因水稻LLRICE62成分；三）、检测失败，重新返回至步骤一）；方式③、一）、将步骤3）中的②所得的待测样品反应体系、阳性对照反应体系、阴性对照反应体系直接置于恒温扩增仪中于60~65℃进行扩增反应， 观察实时PCR结果，即，实时比较扩增反应所得的待测样品反应液、阳性对照反应液、阴性对照液的荧光信号强度；当同时满足阴性对照反应液未出现荧光信号、且阳性对照反应液出现荧光信号，进入步骤二），否则进入步骤三）；二）、进行样品的判定：当待测样品反应液未出现荧光信号时，则待测样品的检测结果为阴性；即，待测样品中 不含有转基因大米LLRICE62成分；当待测样品反应液出现荧光信号时，则待测样品的检测结果为阳性；即，待测样品中含有转基因大米LLRICE62成分；三）、检测失败，重新返回至步骤一）。