[发明专利]一种海参多糖的检测方法

摘要

本发明提供一种海参多糖的检测方法，包括如下步骤：（1）碱性蛋白酶酶解法制备海参供试液；（2）以天青Ⅰ试剂为染色剂、以海刺参粘多糖为标准物质，制备海参多糖标准曲线；（3）以天青Ⅰ试剂为染色剂测定试样，利用标准曲线方程计算出海参多糖相对应的质量数，再计算供试液中海参多糖的浓度。本发明的方法灵敏、准确，可用在日常的产品监测中。

主权项

一种海参多糖的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）制备海参供试液称取2g液体样品或粉碎后的固体样品置于500ml的塑料离心管中，加入100ml去离子水，混合均匀，放入已恒温105℃的干燥箱中加热1h，取出冷却至室温后，加入0.2ml碱性蛋白酶，摇匀，室温下酶解1h，放入100℃水浴锅中，灭活酶10min后，12000r/min高速离心30min，将离心液全部倒入量器中量取体积，移取0.2ml上清液至5ml容量瓶中，去离子水定容至刻度；（2）制备海参多糖标准曲线准确称取250mg天青Ⅰ溶于250ml去离子水中，溶解摇匀，得到1mg/ml的天青Ⅰ储备液，将天青Ⅰ储备液与去离子水按体积比1:29混合均匀，调节使其最大吸光度A=2.1～2.2，置于冰箱中冷藏保存，得到天青Ⅰ试液；准确称取0.4mg海刺参粘多糖标准物质溶于2ml去离子水中，溶解摇匀，置于冰箱中冷藏保存，得到0.2mg/ml的标准试液；在7个10ml试管中，分别加入标准试液0、5、10、20、30、40、50μl，将溶液体积不足50μl的试管补加入水，使每支试管中的溶液体积均为50μl，然后加入1ml天青Ⅰ试液，混匀立即测定其吸光度值，以空白50μl水加入1ml天青Ⅰ试液的吸光度为对照，平行做三组，取其算术平均值，以标准试液中海刺参粘多糖质量μg与其相应的吸光度做直线回归，得到标准曲线；（3）测定试样移取海参供试液50μl于试管中，加入1ml天青Ⅰ试液，混匀立即测定其吸光度值，以空白50μl水加入1ml天青Ⅰ试液的吸光度为对照，利用标准曲线方程计算出海参多糖相对应的质量数，再计算供试液中海参多糖的浓度。