[发明专利]一种仔猪红痢C型产气荚膜梭菌类毒素疫苗的制备方法

摘要

本发明涉及一种仔猪红痢C型产气荚膜梭菌类毒素疫苗的制备方法，将C型产气荚膜梭菌的菌种NCTC3180接种于血平板培养基上，37℃厌氧培养36h；将培养物采用自制的产毒培养基（100毫升PBS缓冲液、2克蛋白胨、1克糊精、2克酵母提取物、1.2克L-精氨酸），在厌氧环境下振荡培养制备类毒素，然后将其灭活、过滤加入佐剂制成。使用时，肌肉注射，母猪在分娩前一月和半月各注射一次，剂量为每次5-10毫升。本发明用于免疫妊娠后期的母猪，新生仔猪通过初乳获得被动免疫，可以预防仔猪红痢。还能预防绵羊猝狙，犊牛肠毒血症，从而能够有效地控制C型产气荚膜梭菌病的流行。

主权项

一种仔猪红痢C型产气荚膜梭菌类毒素疫苗的制备方法，其特征在于包括如下步骤： 将C型产气荚膜梭菌的菌种接种于血平板培养基上，37℃厌氧培养36h复苏；取复苏后的一个单菌落接种于硫乙醇酸盐流体培养基FT，37℃厌氧培养12h增菌；将增菌培养物按照接种量5%体积比接种于产毒培养基，40℃厌氧振荡培养5h；培养液离心，取上清，蔡氏滤器过滤除菌，得到外毒素溶液；在外毒素溶液中加入外毒素溶液体积比0.3%的甲醛，充分振荡混匀，37℃，灭活8天，期间每隔5‑6h振摇一次得到灭活好的类毒素溶液；将白油与span‑80以体积比32:3混匀后，再加入白油与span‑80混合液质量比2%的硬脂酸铝，高压灭菌得到油相；在灭活好的类毒素溶液中加入体积比2%的Tween‑80混合得到水相；将油相与水相以体积比1:1乳化，每100ml乳化液中加入0.01克硫柳汞，混匀后，制成C型产气荚膜梭菌类毒素疫苗； 所述血平板培养基成分为：100毫升蒸馏水、1克葡萄糖、3.8克豆琼脂粉和5毫升绵羊血；所述产毒培养基成分为：100毫升PBS缓冲液、2克蛋白胨、1克糊精、2克酵母提取物和1.2克L‑精氨酸；所述PBS缓冲液的成分为：100毫升去离子水、0.8克氯化钠、0.02克氯化钾、0.358克十二水合磷酸氢二钠和0.027克磷酸二氢钾。