[发明专利]一种固定化好氧反硝化细菌的制备方法

摘要

本发明公开了一种固定化好氧反硝化细菌的制备方法，其步骤：1、丝瓜络的预处理：取老熟的丝瓜剥去外皮，除去内瓤，剪成一定体积的小长方体，放在沸水中煮沸，然后在水龙头下洗涤，放在去离子水中浸泡，在烘箱中烘至恒重，于干燥器中贮存备用。2、好氧反硝化细菌的富集培养及菌悬液的制备：挑选斜面保存的好氧反硝化细菌，加入到经过高温高压灭菌的富集培养基中，得到菌液；3、以聚乙烯醇为载体，以丝瓜络为支持物制备固定化好氧反硝化细菌。聚乙烯醇和丝瓜络均来源广泛，价格低廉，机械强度高，稳定性好，提高固定化细菌的浓度，该方法工艺操作简单，生产成本低，易于在工业上应用。

主权项

一种固定化好氧反硝化细菌的制备方法，其步骤是：1）丝瓜络的预处理：取老熟的丝瓜剥去外皮，除去内瓤，剪成体积为1.2cm×1.2cm×0.7cm的小长方体，放在沸水中煮沸20~30min, 然后在水龙头下洗涤，放在去离子水中浸泡12~24h,在68－72℃烘箱中烘5~6h至恒重，于干燥器中贮存备用；好氧反硝化细菌菌悬液的制备：挑选1~2环斜面保存的好氧反硝化细菌，加入到经过高温高压：121℃，105‑110kPa灭菌的富集培养基中，在29－31℃下曝气培养47－50h，得到菌液；将得到的菌液离心，弃去上清液，用0.9%生理盐水离心洗涤3~4次，再用0.9%生理盐水稀释至体积为1500mL‑1600mL，混合均匀，4℃贮藏备用，最后得到细菌浓度为9×105~9×107cfu/mL的好氧反硝化细菌菌悬液；3）以聚乙烯醇为载体：以丝瓜络为支持物制备固定化好氧反硝化细菌，将聚乙烯醇加热溶解于260mL温度为60‑80℃的去离子水中，冷却至30‑40℃后放置于室温下23－25h, 同40mL细菌浓度为9×105~9×107cfu/mL的好氧反硝细菌的菌悬液混合均匀，然后放入已灭菌的丝瓜络块，混合液浸入到丝瓜络的缝隙中，用无菌镊子将浸满混合液的丝瓜络转移到饱和硼酸溶液中，于4℃冰箱中交联固化12~24h，用无菌水洗涤2~3次后转移至0.9%的生理盐水中，于4℃冰箱中贮存备用；所述的富集培养基组成如下：去离子水 1000mL，KNO3  2 g，K2HPO4  1 g，KH2PO4 1 g，MgSO4  0.4 g，柠檬酸钠  5 g，微量盐溶液  2mL。