[发明专利]以诱导独一味种子萌发幼苗为外植体的组织培养试管苗获得方法

摘要

本发明公开了一种以诱导独一味种子萌发幼苗为外植体的组织培养试管苗获得方法,该方法是先将独一味种子经不同浓度GA3诱导培养，再经多菌灵喷施，经外植体消毒，接种于MS+6-BA0.5mg·L-1+NAA 1.0mg·L-1+蔗糖30g·L-1+琼脂7.0g·L-1中进行初代愈伤组织诱导培养，培养30d后，外植体表面即长出白色或黄白色的质地紧密的愈伤组织。经愈伤组织经芽诱导培养和根诱导培养后，形成组织培养试管苗。该方法很好的解决了，以独一味成株为外植体时，污染率大，不易产生无菌苗的问题；同时建立了在低海拔地区独一味有性生殖受阻，采用组织培养获得试管种苗的方法。

主权项

一种以诱导独一味种子萌发幼苗为外植体的组织培养试管苗获得方法,其特征在于包括如下步骤：（1）选取当年收获健康饱满，具有活力的独一味种子，播种于浸有GA3 50mg·L‑1的滤纸上进行催芽，待幼苗长至约1cm后,，喷施一次800倍液的多菌灵进行植株的表面消毒杀菌预处理，然后收集幼苗；（2）先将作为外植体的独一味幼苗用800倍多菌灵溶液侵泡30min，再用自来水冲洗1h左右，，放入超净工作台内用浓度为75%的酒精消毒10s，无菌水冲洗3次，接着用浓度为0.1%的升汞消毒5min，最后用无菌水震荡洗4～6次，用无菌滤纸吸干幼苗表面的水分备用；（3）在无菌条件下用手术刀在独一味幼苗上划出伤口，接种于愈伤组织诱导培养基:MS+6‑BA 0.5mg.L‑1+NAA 1.0mg·L‑1+蔗糖30g·L‑1+琼脂4.8g·L‑1中进行愈伤组织诱导，所采用的pH值为6.0，培养温度20℃、光照时数10h/d、光照强度为1000～1500Lx，培养时间30d；（4）30d后，选取颜色黄绿、有瘤状突起质地良好的愈伤组织作为外植体，接入丛生芽诱导培养基：MS+6‑BA 1.0～3.0mg·+NAA 0.1～3mg·L‑1+蔗糖30g·L‑1+琼脂4.8g·L‑1中进行丛生芽的诱导，所采用的培养基pH值为6.0，培养温度为20℃、光照时数12h/d、光照强度为1200～1800Lx，培养35d后，愈伤组织诱导分化出大量丛生芽；（5）根的诱导培养，待丛生芽长至2cm时，将丛生芽分成单芽，转接到生根培养基：1/2MS+IBA 0.5mg·L‑1+NAA 0.1mg·L‑1+蔗糖15g·L‑1+琼脂4.8g·L‑1，中诱导生根20d后,待不定根长至2‑3cm时，即可移至高海拔地区温室大棚内进行炼苗移栽。