[发明专利]一种肉鸡用新城疫水包油包水型灭活疫苗制备方法

摘要

本发明提供一种肉鸡用新城疫水包油包水型灭活疫苗制备方法，包括油相的制备、病毒液的制备、病毒的收获、病毒的灭活、病毒液的浓缩以及乳化步骤。本发明制备的疫苗为水包油包水型，粘度低，粒度小，易吸收，同时接种后产生抗体速度较快；本发明选用的佐剂在疫苗制备过程中无需要额外添加任何表面活性剂成分，制备的疫苗安全性好，避免了传统油佐剂难以吸收造成的副作用。

主权项

一种肉鸡用新城疫水包油包水型灭活疫苗制备方法，其特征在于包括以下步骤：1）油相的制备：取疫苗佐剂，使用前进行充分混匀，并置于28‑32℃水浴锅中预热至水浴锅温度，即为油相；2）病毒液的制备：将鸡新城疫病毒毒种用灭菌生理盐水作3000‑6000倍稀释，尿囊腔接种9‑11日龄SPF鸡胚，每胚0.1ml，37℃孵育；3）病毒的收获：选接种后48～120小时之间死亡且病痕明显的鸡胚，收获尿囊液，保存于‑20℃；4）病毒的灭活：向病毒液中加入37%(w/w)的福尔马林溶液，混匀，调整福尔马林终浓度至0.05‑0.15%(w/w)，置于37℃转速为160‑200转/分钟的摇床中灭活14‑18小时；5）病毒液的浓缩：将灭活后的鸡新城疫病毒液通过管式离心机离心，弃去沉淀，将滤过液用截留分子量为200‑500KD的膜包进行2倍浓缩，浓缩后的病毒液即为疫苗水相；6）乳化：将步骤5）制备的疫苗水相置于28‑32℃水浴锅中预热至水浴锅温度，再将其和油相按为1:0.8‑1:1.2的比例（w/w）混合，用磁力搅拌装置进行搅拌，然后采用均质机对其进行乳化，共乳化1‑3遍，即得到一种肉鸡用新城疫水包油包水型灭活疫苗。