[发明专利]一种酶联免疫印迹计生四项联合试剂盒的制备方法

摘要

本发明涉及一种酶联免疫印迹计生四项联合试剂盒的制备方法。灌制SDS－PAGE电泳胶，将巨细胞病毒、弓形虫、风疹病毒、单纯疱疹病毒抗原或抗体进行SDS-PAGE电泳；用电转膜移装置将电泳后的四种病毒抗原或抗体转至硝酸纤维膜上；将含有四种病毒抗原或抗体的硝酸纤维膜进行包被，切割后粘贴到载体板上；收集标准阳性血清，-30℃冻存；在对照线上分别包被四种病毒抗原或含病毒抗体的病人阳性血清；和碱性磷酸酶标记的抗巨细胞病毒、抗弓形虫、抗风疹病毒、抗单纯疱疹病毒抗体或四种病毒抗体及其底物共同组成计生四项免疫印迹试剂盒。本发明方法制得的产品一次性快速检测计生四项、操作简单，成本低、设计新颖，易于观察并做出诊断。

主权项

一种酶联免疫印迹计生四项联合试剂盒的制备方法，其特征在于按照如下步骤操作：1）巨细胞病毒抗原或抗体、弓形虫抗原或抗体、风疹病毒抗原或抗体、单纯疱疹病毒抗原或抗体；碱性磷酸酶标记的抗巨细胞病毒抗体、抗弓形虫抗体、抗风疹病毒抗体、抗单纯疱疹病毒抗体或碱性磷酸酶标记的巨细胞病毒抗体、弓形虫抗体、风疹病毒抗体、单纯疱疹病毒抗体市售购买；2）灌制SDS－PAGE电泳胶，将巨细胞病毒抗原或抗体、弓形虫抗原或抗体、风疹病毒抗原或抗体、单纯疱疹病毒抗原或抗体进行SDS‑PAGE电泳，电泳结束后进行考马斯亮蓝染色，然后进行脱色；依据经脱色后的电泳胶上的各病毒抗原或抗体的条带位置进行硝酸纤维素膜上对应条带位置的标记；3）灌制SDS－PAGE电泳胶，分别将巨细胞病毒抗原或抗体、弓形虫抗原或抗体、风疹病毒抗原或抗体、单纯疱疹病毒抗原或抗体进行SDS‑PAGE电泳；4）用电转膜移装置将电泳后的巨细胞病毒抗原或抗体、弓形虫抗原或抗体、风疹病毒抗原或抗体、单纯疱疹病毒抗原或抗体转至硝酸纤维膜上，电转完毕后，取出膜，用PBS缓冲液冲洗一次，晾干；5）将含有巨细胞病毒抗原或抗体、弓形虫抗原或抗体、风疹病毒抗原或抗体、单纯疱疹病毒抗原或抗体的硝酸纤维膜进行包被；6）将包被好的巨细胞病毒抗原或抗体、弓形虫抗原或抗体、风疹病毒抗原或抗体、单纯疱疹病毒抗原或抗体剪下，粘贴到载体板上；7）标准阳性血清的获得：收集风疹病毒、巨细胞病毒、弓形体和单纯疱疹病毒病人的阳性血清，得到阳性参照血清，定为标准阳性血清，‑30℃冻存；8）在四条对照线上分别包被巨细胞病毒抗原、弓形虫抗原、风疹病毒抗原、单纯疱疹病毒抗原或分别包被含巨细胞病毒抗体、弓形虫抗体、风疹病毒抗体、单纯疱疹病毒抗体的病人阳性血清，晾干；9）和碱性磷酸酶标记的抗巨细胞病毒抗体、抗弓形虫抗体、抗风疹病毒抗体、抗单纯疱疹病毒抗体或巨细胞病毒抗体、弓形虫抗体、风疹病毒抗体、单纯疱疹病毒抗体及其底物共同组成计生四项免疫印迹试剂盒；其中，所述底物是硝基蓝四唑和5‑溴‑4‑氯‑3‑吲哚基‑磷酸盐体积比例为1：49的混合物。