[发明专利]一种鸭源性成分掺假的快速鉴别方法

摘要

一种鸭源性成分掺假的快速鉴别方法，属于生物化工技术领域。本发明包括如下步骤：（1）结合鸭源性成分特异核酸序列DNA的金纳米粒子探针的制备；（2）样品中核酸片段的提取和处理；（3）鸭源性成分掺假的快速鉴别。本发明利用金纳米粒子聚集会发生变色的特殊光学性质，结合特异性的鸭源性核酸序列，建立了特异性鸭源DNA序列的探针检测体系，根据比色结果实现了鸭源性成分的快速鉴别，当样品中含有5%及以上的鸭源性成分即可被检测出来。填补了现有的鸭源性成分的快速鉴别技术空白，使得现场快速鉴别肉类掺假成为可能。

主权项

一种鸭源性成分掺假的快速鉴别方法，其特征在于步骤为：（1）结合鸭源性成分特异核酸序列DNA的金纳米粒子探针的制备：采用粒径为5~30nm，浓度为30nmol/L，表面带负电的金纳米粒子，用超纯水透析，除去合成过程中过量的柠檬酸三钠分子；取100μL金纳米粒子溶液至1.5mL EP管，用超纯水稀释至1mL，得到3nmol/L浓度的金纳米粒子溶液，加入A260=0.27即浓度为10μg/mL的鸭肉特异性DNA序列探针10~50μL，振荡混匀，将EP管置于水浴中温育5~30min，水浴温度为25~60℃，此时核酸片段吸附在金纳米粒子表面，得到了具有一定耐盐能力的金纳米粒子探针体系；DNA：5’‑CAG CGT CTA CGG CTC CAC CTT CTT TGT CGC‑3’，（2）样品中核酸片段的提取和处理：取含有疑似鸭肉成分的肉类，剪碎后，准确称取0.1g置于1.5mL EP管中，加入1mL组织裂解液，组织裂解液组成为：pH 7.5的10 mM Tris‑HCl、100 mM NaCl、10 mM EDTA、0.5% SDS和0.4 mg/mL proteinase K，盖上盖子，将EP管置于沸水中煮，时间为10~30min，将EP管于5000rpm离心 10min，吸取上清，上清中加入等体积抽提液，抽提液组成为：酚:氯仿:异戊醇体积比=25:24:1，混匀，静置5min，5000rpm离心 10min，吸取上层水相上清液，上清液中加入等体积冰无水乙醇，轻轻摇匀，静置15min，用吸头小心吸取析出的DNA’形成的白色絮状物，用70%乙醇漂洗2次，加入100μL超纯水溶解，将提取的DNA’样品进行紫外检测，确认A260/A280的数值在1.8~1.9，并用超纯水调节DNA’浓度，使其A260=2.7，此时DNA’浓度100μg/mL；（3）鸭源性成分掺假的快速鉴别：吸取提取处理得到的DNA’样品10~50μL，加至1mL的金纳米粒子探针体系，37℃温育5~30min，探针体系中加入10% NaCl溶液100μL，混匀，静置5min，观察金纳米粒子探针体系的颜色变化，如果颜色仍是红色，说明检测的DNA’样品中不含鸭肉DNA；如果探针体系颜色变成灰色或有蓝灰色沉淀产生，说明检测的DNA’样品中含有鸭肉DNA，且鸭肉占的比例至少为5%。