[发明专利]一种乳清蛋白的纯化方法

摘要

本发明提供了一种乳清蛋白的纯化方法，以哺乳动物乳汁为原料，经预处理得到乳清，进行疏水层析分离，得到纯化的α‑乳清白蛋白和β‑乳球蛋白。还提供了一种当乳清蛋白含有重组人α‑乳清白蛋白时，在进行疏水层析分离之前，先通过阴离子交换层析，使重组人α‑乳清白蛋白与内源的α‑乳清白蛋白以及β‑乳球蛋白分离开，再进行疏水层析分离，得到纯化的重组人α‑乳清白蛋白及动物内源的α‑乳清白蛋白和β‑乳球蛋白的方法。

主权项

一种乳清蛋白的纯化方法，其特征在于，以含有重组人α‑乳清白蛋白的哺乳动物乳汁为原料，经预处理得到乳清，通过阴离子交换层析，分离得到重组人α‑乳清白蛋白纯品，以及富含内源α‑乳清白蛋白和β‑乳球蛋白的分离溶液，再通过膜分离或疏水层析进行精细纯化，得到内源α‑乳清白蛋白纯品、β‑乳球蛋白纯品和纯度更高的重组人α‑乳清白蛋白纯品；所述预处理为通过高速离心脱脂，采用0.8‑1.4μm陶瓷膜微滤技术除菌，并采用80nm‑0.2μm陶瓷膜去除脱脂乳中的酪蛋白，得到澄清的乳清；所述阴离子交换层析是将乳清上样到经30‑60mM、pH 6.5‑7.5的Tris‑Cl缓冲液平衡的阴离子交换层析柱，收集含有重组人α‑乳清白蛋白的穿透液；重组人α‑乳清白蛋白精细纯化是通过对含有重组人α‑乳清白蛋白的穿透液进行膜分离，得到重组人α‑乳清白蛋白纯品；或通过对含有重组人α‑乳清白蛋白的穿透液通过疏水层析分离去除杂蛋白，将含有重组人α‑乳清白蛋白的穿透液上样到用电导率为130‑160ms/cm的(NH)2SO4，10‑50mM、pH6.5‑7.5的磷酸盐缓冲液平衡的Butyl疏水互作层析柱；上样完毕用电导率为130‑160ms/cm的(NH)2SO4，10‑50mM、pH6.5‑7.5的磷酸盐缓冲液冲洗层析柱待280nm吸收信号至基线，使用电导率为50‑80ms/cm的(NH)2SO4，10‑50mM、pH6.5‑7.5的磷酸盐缓冲液洗脱杂蛋白，使用电导率为6ms/cm以下、10‑50mM，pH6.5‑7.5的磷酸盐缓冲液洗脱重组人α‑乳清白蛋白，得到重组人α‑乳清白蛋白纯品；所述的内源α‑乳清白蛋白与β‑乳球蛋白纯化方法是将乳清上样到30‑60mM、pH 6.5‑7.5的Tris‑Cl缓冲液平衡的阴离子交换层析柱，继续使用30‑60mM、pH6.5‑7.5的Tris‑Cl缓冲液冲洗层析柱至基线，用电导率为50‑84ms/cm的NaCl，50mM、pH6.5‑7.5的Tris‑Cl缓冲液洗脱层析柱，收集得到富含内源α‑乳清白蛋白与β‑乳球蛋白的分离溶液；内源α‑乳清白蛋白与β‑乳球蛋白精细纯化是将富含内源α‑乳清白蛋白和β‑乳球蛋白的分离溶液上样到用电导率为130‑160ms/cm的(NH)2SO4，10‑50mM、pH6.5‑7.5的磷酸盐缓冲液平衡的Butyl疏水互作层析柱，流速为100‑300cm/h，上样过程中收集含有β‑乳球蛋白的穿透液，得到β‑乳球蛋白纯品；上样完毕用电导率为130‑160ms/cm的(NH)2SO4，10‑50mM、pH6.5‑7.5的磷酸盐缓冲液冲洗层析柱待280nm吸收信号至基线，使用电导率为50‑80ms/cm的(NH)2SO4，10‑50mM、pH6.5‑7.5的磷酸盐缓冲液洗脱杂蛋白，使用电导率为6ms/cm以下、10‑50mM、pH6.5‑7.5的磷酸盐缓冲液洗脱α‑乳清白蛋白，得到内源α‑乳清白蛋白纯品。