[发明专利]中蜂囊状幼虫病毒抗体的ELISA检测方法

摘要

一种中蜂囊状幼虫病毒抗体的ELISA检测方法，用碳酸盐缓冲液作为包被液将纯化的中蜂囊状幼虫病毒抗原稀释至工作浓度，加入酶标板的酶标孔内，温育，密封培养过夜；弃掉上层液体，洗涤；向酶标孔内加入封闭液，密封温育或密封培养过夜，洗涤；将待检卵黄抗体进行倍比稀释，弃掉上层液体，洗涤；加入标记的兔抗鸡IgG进行反应；弃掉上层液体，洗涤；加入底物显色液，加入终止液，终止反应；用酶标仪在490nm～599nm下测定OD值，确定抗体效价。该检测方法具有使用简便、敏感性高、检测成本低、生物安全度高的特点，可以评价制备的中蜂囊状幼虫病毒抗体的效价，确保临床上用量的准确性，达到预期治疗效果，避免药物浪费或用量不足。

主权项

一种中蜂囊状幼虫病毒抗体的ELISA检测方法，其特征是：具体步骤如下：1.1、用碳酸盐缓冲液作为包被液将纯化的中蜂囊状幼虫病毒抗原稀释至工作浓度，加入酶标板的酶标孔内，酶标孔每孔加入量为50µL～100µL，抗原含量为55ng/孔～65ng/孔，温育，密封培养过夜，上层为液体，包被抗原吸附在酶标板上；1.2、弃掉上层液体，用PBST缓冲液洗涤包被抗原，重复洗涤3次～5次，吸干水分；1.3、向酶标孔内加入封闭液，每孔加入量为50µL～100µL，密封温育或密封培养过夜，用PBST缓冲液洗涤包被抗原，重复洗涤3次～5次，吸干水分；1.4、将待检卵黄抗体按2的倍数进行倍比稀释，并依次加入酶标孔，同时设阴性对照卵黄抗体、阳性对照卵黄抗体，每孔加入量为50µL～100µL，在36.5℃～37.5℃下反应2h～3h，上层为液体，包被抗原与抗体复合物吸附在酶标板上；1.5、弃掉步骤1.4的上层液体，用PBST缓冲液洗涤被抗原与抗体复合物，重复洗涤3次～5次，吸干水分；1.6、向酶标孔内加入稀释的辣根过氧化酶标记的兔抗鸡IgG，每孔加入量为50µL，在36.5℃～37.5℃下反应lh～1.5h后；弃掉上层液体，用PBST缓冲液进行洗涤，重复洗涤3次～5次，吸干水分；1.7、向酶标孔内加入底物显色液，每孔加入量为50µL～100µL，在室温下避光显色10min～15min，加入终止液，每孔加入量为5µL～10µL，终止反应；1.8、用酶标仪在490nm～599nm下测定OD值，OD值≥1.7854为阳性，OD值＜1.7854为阴性，测定OD值是阳性的步骤1.4中倍比稀释最大稀释倍数为抗体效价。