[发明专利]黄蘑菇标准化组分制法及其在肝癌治疗中的应用

摘要

本发明涉及一种黄蘑菇标准化组分制法，该方法包括以下步骤：⑴将黄蘑菇干燥粉碎后进行水提并离心收集菌渣，该菌渣用丙酮提取并离心收集滤液；滤液经减压浓缩至膏状，即得丙酮提取物；⑵丙酮提取物用正己烷-乙酸乙酯混合液溶解后过滤，得到含丙酮提取物的样品溶液；含丙酮提取物的样品溶液在制备色谱上分离，即得Fr1、Fr2、……、Fr13、Fr14共14个标准化组分样品；⑶将14个标准化组分样品采用iCelligence实时无标记细胞分析仪进行体外抗肝癌细胞模型筛选从而确定第7、第8、第9、第10、第11、第13以及第14号标准化组分具有体外抑制人肝癌细胞贴壁及增殖活性。本发明不但工艺简单，而且易于实施。同时，本发明所得的活性组分可应用于肝癌治疗中。

主权项

黄蘑菇标准化组分制法，包括以下步骤：⑴将黄蘑菇经干燥粉碎后，按1g：4mL~20 mL的料液比用分析纯水在40~90℃提取3次，每次1~10h，并离心收集菌渣，该菌渣用丙酮按1g：1mL~20 mL的料液比在10~80℃提取3次，每次5~72h，并离心收集滤液；所述滤液经减压浓缩至膏状，即得丙酮提取物；⑵所述丙酮提取物中加入其体积的1~6 倍正己烷‑乙酸乙酯混合液进行溶解，溶解后过0.45μm的有机滤膜，得到含丙酮提取物的样品溶液；所述含丙酮提取物的样品溶液在以10μm硅胶为分离基质的制备色谱上分离，即得Fr1、Fr2、……、Fr13、Fr14共14个标准化组分样品；⑶将所述14个标准化组分样品采用iCelligence实时无标记细胞分析仪按下述步骤进行体外抗肝癌细胞模型筛选：①确认iCelligence测试系统正确连接，37℃、5%CO2培养箱工作正常；②8孔细胞板内按150μL/孔加入培养基，室温放置15分钟后置于iCelligence测试台上测基线；所述培养基是指含10%胎牛血清的低糖DMEM培养基；③将所述14个标准化组分样品中的每个组分样品用DMSO配制成浓度为5mg/mL的样品溶液；④将对数生长期的人肝癌细胞HepG2，用胰酶按常规方法消化后，以950rpm的速率离心5min，将细胞重悬于所述培养基中，并将细胞浓度调至2.85×104个/mL，得到对数生长期的人肝癌细胞HepG2悬液，并按345 μL/孔、每孔10000个细胞的量将所述对数生长期的人肝癌细胞HepG2悬液接种入所述8孔细胞板的相应孔中，室温放置30 min；⑤将所述14个标准化组分样品分两批按每孔加5μL所述浓度为5mg/mL的样品溶液、每孔加345μL所述对数生长期的人肝癌细胞HepG2悬液的量接种入所述8孔细胞板的相应孔中，并置于所述iCelligence测试台，放入所述培养箱中开始检测；45 h后得到两张黄蘑菇抗肝癌标准化组分的活性检测图；其中纵坐标为细胞指数，横坐标为实时细胞增殖动态效应；⑥根据所述两张黄蘑菇抗肝癌标准化组分的活性检测图，当细胞增殖曲线呈现上升平缓或不上升的趋势，则说明细胞分裂减缓或停止，即细胞不能进行正常的分裂，从而确定第7、第8、第9、第10、第11、第13以及第14号标准化组分具有体外抑制人肝癌细胞贴壁及增殖活性。