[发明专利]一种新的循环肿瘤细胞富集技术及试剂盒制备方法

摘要

一种新的循环肿瘤细胞富集技术及试剂盒制备方法，包括以下步骤：根据排列组合所有可能的CD45异构体蛋白序列信息，设计抗原，从而制作多种抗体，并筛选出一种能够识别所有CD45异构体的抗体，将其偶联到磁珠上，进而从血液中捕获所有白细胞；采集10ml外周静脉血；用渗透裂解液裂解除去红细胞；混合设计的特异抗体、磁珠和剩下的无红细胞的细胞液，分离出白细胞；得到含较高浓度循环肿瘤细胞的细胞群。本发明采用负收集技术，使得循环肿瘤细胞所占比例大幅度提高，方便快速准确的检测，同时由于采用了负筛选手段，循环肿瘤细胞无损失的保留下来，防止了某些循环肿瘤细胞的损失造成肿瘤疾病无法得到检测，耽误患者治疗。

主权项

一种新的循环肿瘤细胞富集技术，其特征是，包括以下步骤：(1)分析所有可能的CD45异构体蛋白序列，设计多个抗原，制备多个抗体；(2)通过制作多种抗体，从而筛选出能够识别所有CD45异构体的抗体，将其偶联到磁珠上，进而从血液中捕获所有白细胞，其中抗原序列包括有胞外区域的全长，不同外显子拼接的胞外区域全长，旨在筛选出一种抗体能够识别他们的共同区段，之所以不单独采用橙色蛋白区域是因为我们想通过更真实的模拟细胞膜外部分的蛋白构象，直接用多种CD45异构体抗原去筛选我们的抗体，从而得到的抗体能够在真实水平下直接识别CD45多种异构体；(3)将血液中分离到的白膜层细胞中的占大多数的CD45+的细胞筛选掉，得到的残余细胞中，循环肿瘤细胞所占比例大幅度提高，从而能快速的获得高浓度的循环肿瘤细胞。