[发明专利]利用重组人IL-26分选小鼠Th17细胞的方法有效
| 申请号： | 201310489260.5 | 申请日： | 2013-10-17 |
| 公开（公告）号： | CN103555667A | 公开（公告）日： | 2014-02-05 |
| 发明（设计）人： | 田志强;倪兵;吴玉章;杨玓;颜秋萍;田易;张轶;倪东京;张梦洁;杨爽;朱小霜 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军第三军医大学 |
| 主分类号： | C12N5/0783 | 分类号： | C12N5/0783 |
| 代理公司： | 北京同恒源知识产权代理有限公司 11275 | 代理人： | 赵荣之 |
| 地址： | 400038 重*** | 国省代码： | 重庆;85 |
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| 摘要： | 本发明公开了利用重组人IL-26分选小鼠Th17细胞的方法，具体为收集小鼠外周血，分离单核细胞，然后用PBS洗涤，离心收集细胞，用PBS液重悬后分离CD4+CD45RO+T细胞；然后将CD4+CD45RO+T细胞用同种荧光标记的IL23R、CD161、CCR6三种抗体染色，用流式细胞仪分选IL23R、CD161和CCR6为阴性的细胞，得IL23R-CD161-CCR6-细胞；所得IL23R-CD161-CCR6-细胞用小鼠CD3抗体和重组人IL-26刺激细胞，得小鼠Th17细胞，获得的小鼠Th17细胞具有活性功能，并且纯度高，其纯度达87%，为体外研究Th17细胞奠定了基础。 | ||
| 搜索关键词： | 利用 重组 il 26 分选 小鼠 th17 细胞 方法 | ||
【主权项】：
利用重组人IL‑26分选小鼠Th17细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：A.收集小鼠外周血，加入PBS稀释血液，然后覆盖于人淋巴细胞分离液表面，人淋巴细胞分离液的体积相当于稀释血液体积的1/4‑2倍，然后在转速为2000‑2500rpm条件下离心20‑30分钟，吸取淋巴细胞层，并用相当于淋巴细胞层体积1‑20倍的PBS洗涤，离心收集细胞，用PBS液重悬细胞后分离CD4+CD45RO+T细胞；B.将步骤A分离的CD4+CD45RO+T细胞用同种荧光标记的IL23R、CD161和CCR6三种抗体染色，用PBS洗涤细胞后在800‑1600rpm条件下离心8‑15分钟，然后用流式细胞仪分选IL23R、CD161和CCR6为阴性的细胞，得IL23R‑CD161‑CCR6‑细胞；C.将步骤B所得IL23R‑CD161‑CCR6‑细胞加入含胎牛血清的RPMI1640培养基，RPMI1640培养基中胎牛血清体积分数为10%，然后置于37℃、体积分数为5%的CO2培养箱内培养5‑8小时，再加入100‑2000ng/mL的小鼠CD3抗体和30‑400ng/mL的重组人IL‑26刺激细胞2‑24小时，收集细胞，得为小鼠Th17细胞。
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