[发明专利]一种基于单克隆抗体的检测食品中鼠伤寒沙门氏菌的双抗体夹心法

摘要

一种基于单克隆抗体的检测食品中鼠伤寒沙门氏菌的双抗体夹心法，属于免疫分析技术领域。本发明应用鼠伤寒沙门氏菌ATCC13311和光滑型的鼠伤寒沙门氏菌LPS混合免疫7周龄BALB/c小鼠，经免疫、融合、筛选得10株LPS单克隆抗体，分别标记HRP，并以鼠伤寒沙门氏菌进行两两配对。以6E2CGMCCNo.7206单抗作为包被抗体和酶标抗体，以鼠伤寒沙门氏菌为标准品建立了夹心ELISA方法，LOD为500cfu/mL。用理化性质高度均一、特异性好、可大量制备的单克隆抗体建立的夹心法灵敏度高，成本低，与肠炎沙门氏菌、亚利桑那沙门氏菌、E.coli、E.coliO157:H7、阪崎肠杆菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特菌无交叉反应，为食品中鼠伤寒沙门氏菌检测提供了快速高效的分析手段。

主权项

一种基于单克隆抗体的检测食品中鼠伤寒沙门氏菌的双抗体夹心法，其特征在于步骤为：（1）鼠伤寒沙门氏菌LPS单克隆抗体的制备     以混合后的鼠伤寒沙门氏菌ATCC 13311菌体和光滑型的鼠伤寒沙门氏菌LPS为免疫原，免疫 7周龄的BALB/c小鼠，经免疫、融合、筛选，得10株LPS单克隆抗体；（2）单克隆抗体的配对筛选将纯化后的10株LPS单克隆抗体分别标记辣根过氧化物酶HRP，直接法鉴定标记成功后进行夹心法配对；配对参数如下：包被抗体5μg/mL；包被液为pH9.6、0.01M的碳酸盐缓冲液；标品浓度10^7cfu/mL；标品稀释液pH7.2、0.01M的PBS；酶标抗体稀释1000倍使用；在此条件下，实验成功得到了40对P/N值>5的配对；（3）夹心法的建立选择检测限稳定、灵敏的配对，以6E2抗体即CGMCC No.7206分别为包被抗体和酶标抗体建立夹心法；具体参数如下：抗体包被浓度：5μg/mL，包被液：pH9.6、0.01M的碳酸盐缓冲液，标品稀释液：pH7.2、0.01M的PBS+0.1%Tween，检测抗体浓度：1.6μg/mL，反应时间：包被、封闭：37℃、2h；标准品：37℃、1h；检测抗体：37℃、1h；显色10min；优化后鼠伤寒沙门氏菌夹心法LOD：500cfu/mL。