[发明专利]一种粉状毕赤酵母高密度发酵工艺方法

摘要

本发明属于农业微生物技术领域，具体涉及一种粉状毕赤酵母高密度发酵工艺方法，包括种子制备和发酵罐培养。发酵罐培养条件：装液量40%～60%（V/V），接种量1%～5%（V/V），控制温度28～40℃，通气量1～3.5VVM，起始转速300r/min，每隔4h提高转速100r/min，提高至700r/min保持不变，发酵周期20～30h。发酵过程中通过滴加NaOH溶液调节发酵液pH为6.0左右。发酵13h后间歇补加一定量的葡萄糖，20～30h后发酵结束，有效活菌数为30.0‑35.0亿/mL。采用本发明的发酵工艺方法，不仅菌体量明显大幅度提高，而且工艺简洁、效率优于现有技术、生产成本更低。

主权项

1.一种粉状毕赤酵母高密度发酵工艺方法，其步骤如下：(1)、将斜面保存的粉状毕赤酵母用接种环挑取一环，接入装有30～50mL YEPD培养基的三角瓶中，在28～40℃条件下，150～200r/min下振荡培养，当菌体OD600达到10.0～12.0时即得摇瓶种子液；(2)、称取葡萄糖50～200g，加蒸馏水溶解并补充至200mL，在103.4kPa蒸汽压力、110～117℃温度下灭菌20～30min得补料用葡萄糖溶液；(3)、将摇瓶种子液按1％～5％的接种量接种于发酵培养基中，发酵罐装液量40％～60％(V/V)，控制罐温28～40℃，通风比1～3.5VVM，起始转速300r/min，每隔4h转速提升100r/min，提高到700r/min后保持不变，在此发酵条件下，通过滴加5～8mol/L NaOH溶液使发酵液pH保持在6.0左右，直至发酵结束；当发酵至10～16h时开始补料，之后每隔2h补料，共补料5次，补料完成后继续发酵，发酵周期为20～30h；所述补料的成分为步骤(2)制得的补料用葡萄糖溶液，其浓度为250～1000g/L，每1L发酵液每次加入该补料 用葡萄糖溶液为40mL，使发酵体系中葡萄糖浓度为2～15g/L；所述发酵培养基的配方如下：葡萄糖10～100g，蛋白胨5～20g，磷酸二氢钾1～6g，硫酸镁0.1～2g，玉米浆2～30g，用蒸馏水补充至1000mL；所述发酵培养基的制备步骤如下：S1、将蛋白胨5～20g、磷酸二氢钾1～6g、硫酸镁0.1～2g、玉米浆2～30g混合，用蒸馏水将固体全部溶解并补充至900mL，用5～8mol/L的NaOH调整pH到6.0～6.8，在103.4kPa压力、115～121℃温度下灭菌20～30min得培养基；S2、称取葡萄糖10～100g，加蒸馏水溶解并补充至100mL，在103.4kPa蒸汽压力、110～117℃温度下灭菌20～30min，得葡萄糖溶液；S3、将步骤(2)得到的葡萄糖溶液加入到灭过菌的步骤(1)的培养基中，得到发酵培养基；所述粉状毕赤酵母为粉状毕赤酵母ACCC 21153和粉状毕赤酵母ACCC 20026中的任意一种。