[发明专利]检验CYP3A4内含子SNP具有增强子和启动子功能的报告基因方法

摘要

本发明涉及一种针对人的CYP3A4内含子序列和验证该序列SNP同时具有增强子和启动子增强表达功能的检验CYP3A4内含子SNP具有增强子和启动子功能的报告基因方法，包括从人CYP3A4基因组中选择内含子序列、CYP3A4启动子序列荧光素酶报告基因质粒的构建、CYP3A4内含子SNP增强子荧光素酶报告基因载体的构建、CYP3A4内含子SNP启动子荧光素酶报告基因载体的构建、HepG2细胞培养和转染、双荧光素酶活性测定，应用本发明发现人CYP3A4内含子SNP同时具有增强子和启动子的功能，应用本发明可以筛选提高CYP3A4酶的产量的SNP，对进一步体外研究或筛选CYP3A4酶代谢的药物将具有重要的应用价值。

主权项

一种检验CYP3A4内含子SNP具有增强子和启动子功能的报告基因方法，需要在人的CYP3A4基因组中选择内含子SNP，其中所述的内含子SNP具有至少如下特征：（I）位于编码CYP3A4酶的CYP3A4基因的两个外显子之间的内含子，并且（II）内含子包含典型的GT……AG剪接结构，即5′端有GT剪接位点，3端有AG剪接位点，并且（III）在内含子3′末端剪接点的上游20～50核苷酸范围内，还有一个在剪接中有重要作用的位点，其序列中含有A，称为分支部位，并且（IV）体内实验已证实该内含子中的SNP影响CYP3A4酶活性，并且（V）内含子中该SNP变异不影响剪接，即不影响II）中的剪接位点及III）中的分支部位，并且（VI）内含子中该SNP变异不编码micro RNA。