[发明专利]一种用于细胞培养基的大豆活性肽添加剂

摘要

本发明提供一种用于细胞培养基的大豆活性肽添加剂，所述大豆活性肽添加剂中分子量小于1000道尔顿的低聚肽占总蛋白的质量百分比≥90%，并且所述低聚肽至少包括YE、ERQ、QDPQ、EGGAH、PQGAR、AAGGSN中的一种或多种。本发明的大豆活性肽添加剂可以与多种基础培养基进行复配，用于对多种动物细胞进行无血清培养，其不仅大大降低了细胞培养基的成本，减少了动物源成分所带来的污染等问题，还能够促进细胞增殖，提高细胞活力以及增强细胞产物的表达。

主权项

一种用于细胞培养基的大豆活性肽添加剂，其特征在于，所述大豆活性肽添加剂中分子量小于1000道尔顿的低聚肽占总蛋白的质量百分比≥90%，并且所述低聚肽至少包括YE、ERQ、QDPQ、EGGAH、PQGAR和AAGGSN；所述大豆活性肽添加剂是通过依次采用非特异性蛋白酶和特异性蛋白酶对大豆分离蛋白进行酶解后，经分离纯化制得的；其中，所述非特异性蛋白酶选自木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶和菠萝蛋白酶中的一种或多种，所述特异性蛋白酶选自羧肽酶、风味蛋白酶中的一种或两种；所述的大豆活性肽添加剂的制备方法，具体包括如下步骤：1）首先采用非特异性蛋白酶对大豆分离蛋白进行第一酶解处理，制得第一酶解液；然后采用特异性蛋白酶对所述第一酶解液进行第二酶解处理，制得大豆蛋白酶解液；2）将所述大豆蛋白酶解液进行离心，依次对离心上清液进行微滤、阳离子交换、纳滤和超滤，制得大豆活性肽；其中所述微滤采用孔径为50～500nm的滤膜进行，所述纳滤采用截留分子量为100～300道尔顿的滤膜进行，所述超滤采用截留分子量为5000～13000道尔顿的滤膜进行；所述非特异性蛋白酶的酶量为每克蛋白2000～6000单位，其中包括0～1000单位酶量的木瓜蛋白酶、500～2000单位酶量的碱性蛋白酶、500～2000单位酶量的中性蛋白酶和0～1500单位酶量的菠萝蛋白酶中的两种或多种；所述特异性蛋白酶的酶量为每克蛋白2000～3000单位，其中包括500～2000单位酶量的羧肽酶和1000～2000单位酶量的风味蛋白酶中的一种或两种；所述步骤1）具体包括：将大豆分离蛋白与水混合制成蛋白溶液后，以每克蛋白2000～6000单位的酶量向所述蛋白溶液中加入所述非特异性蛋白酶，于40～60℃下第一酶解处理1.5～4.5小时，制得第一酶解液；再以每克蛋白2000～3000单位的酶量向所述第一酶解液中加入所述特异性蛋白酶，于40～60℃下第二酶解处理2～3小时后，灭酶，制得大豆蛋白酶解液；步骤2）中所述微滤具体包括：先采用孔径为200～500nm的滤膜对所述离心上清液进行第一微滤，制得第一微滤液，然后采用孔径为50～200nm的滤膜对所述第一微滤液进行第二微滤，制得第二微滤液；步骤2）中所述纳滤具体包括：采用截留分子量为100～300道尔顿的卷式膜将经阳离子交换后的离心上清液浓缩至蛋白质含量为5～10%后进行洗滤，使经洗滤后的离心上清液中无机盐的含量≤5%；再将经洗滤后的离心上清液浓缩至蛋白质含量为20～40%。