[发明专利]K-ras基因12和13密码子突变检测的方法

摘要

本发明涉及一种用于K‑ras基因12和13密码子突变检测的方法，该方法可以检测患者体内分离出的DNA样本中K‑ras基因是否存在K‑ras基因12和13密码子突变。属于生命科学和技术领域。本发明的方法包括一个以聚合酶链式反应，反应体系中包含特异性的上游引物和下游引物以及按特定方法处理的一组探针，在特定条件下进行的核苷酸单链的杂交及解链过程，并利用荧光定量PCR仪收集解链时的荧光信号来判断变异的存在与否。

主权项

1.一种K‑ras基因12和13密码子突变检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒含有：(1)DNA提取试剂：包含NP‑40，chelex100，TRIS‑HCL；(2)DNA聚合酶：Taq DNA聚合酶，无核酸外切酶活性；(3)PCR反应液：包含dNTPs，引物，DNA聚合酶，PCR Buffer，标记探针；其中，标记探针包括通用探针和分型探针；通用探针3’端使用BHQ标记；分型探针5’端使用FAM或TET标记，3’端最后一个核苷酸进行磷酸化处理；所述通用探针为General probe：AATATAAACTTGTGGTAGT‑BHQ；所述分型探针包括12‑w probe：FAM‑TGGAGCTGGTdIdICGTAGGCAA‑PO4和13‑w probe：TET‑TGGAGCTdIdITGGCGTAGGCAA‑PO4；引物具体信息如表1：表1引物名称序列F primerATTATAAGGCCTGCTGAAAATR primerTCTGAATTAGCTGTATCGTCPCR反应液的配置如表2：表2组份体积2×PCR Buffer10ulF primer1ulR primer1ulGeneral probe1ul12‑w probe0.5ul13‑w probe0.5ulTaq酶1ulH₂O5ulDNA模板5ul共计25ul使用的PCR反应程序如表3：表3所使用的DNA聚合酶无核酸外切酶活性，包括5’核酸外切酶活性和3’核酸外切酶活性。