[发明专利]一种产5‑酮基米尔贝霉素的链霉菌及生产5‑酮基米尔贝霉素的方法有效
| 申请号： | 201310541829.8 | 申请日： | 2013-11-04 |
| 公开（公告）号： | CN103789339B | 公开（公告）日： | 2017-08-04 |
| 发明（设计）人： | 黄隽;徐赛珍;周敏 | 申请（专利权）人： | 浙江海正药业股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/76 | 分类号： | C12N15/76;C12N15/66;C12N1/21;C12P17/18;C12R1/465 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司11227 | 代理人： | 赵青朵 |
| 地址： | 318000 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明涉及基因重组技术领域，尤其涉及一种产5‑酮基米尔贝霉素的链霉菌及生产5‑酮基米尔贝霉素的方法。本发明提供了一种用于敲除链霉菌milF基因的重组载体，包括milF基因同源片段，该片段的序列为在如SEQ ID NO2所示核苷酸序列中第158～924位核苷酸间缺失105～767个核苷酸。并提供了该重组载体的构建方法，以及采用该重组载体敲除链霉菌中milF基因的方法，及milF基因被敲除的链霉菌。该链霉菌可以直接发酵产生5‑酮基米尔贝霉素，简化了米尔贝肟的合成工艺，并避免了传统的化学合成方法带来的污染。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 米尔 霉素 霉菌 生产 方法 | ||
【主权项】：
用于敲除产米尔贝霉素A3和/或米尔贝霉素A4的原始链霉菌milF基因的基因敲除质粒，其特征在于，其由骨架、抗性标记基因和顺序连接的上游核苷酸片段、milF基因同源片段、下游核苷酸片段组成；其中，所述上游核苷酸片段为如SEQ ID NO:1所示核苷酸序列中的第n～2467个核苷酸，1≤n≤2178，n为整数；所述milF基因同源片段为在如SEQ ID NO:2所示核苷酸序列中第158～924位核苷酸间缺失105～767个核苷酸的序列；所述下游核苷酸片段为如SEQ ID NO:3所示核苷酸序列中的第1～m个核苷酸，997≤m≤3108，m为整数；所述milF基因同源片段的序列如SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:9所示。
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