[发明专利]一种用无水氯化钙诱导中华绒螯蟹三倍体的方法

摘要

本发明公开了一种用无水氯化钙诱导中华绒螯蟹三倍体的方法，首先利用自然交配的亲蟹获得正常发育的受精卵；然后根据对比试验确定了无水氯化钙的三倍体诱导有效性并对其诱导参数进行了优化处理；最后根据优化参数进行了中华绒螯蟹三倍体的批量诱导。本发明用无水氯化钙作为诱导试剂，绿色环保，对生物、人体及环境无毒害作用；本方法明显提高了中华绒螯蟹三倍体诱导的稳定性和有效性，为中华绒螯蟹三倍体苗种规模化培育提供了技术支持。

主权项

一种用无水氯化钙诱导中华绒螯蟹三倍体的方法，其特征在于，所述方法具体步骤如下：（1）中华绒螯蟹受精卵的获得：已确认交配过的雌蟹单只置于产卵箱内待产，15℃下亲蟹产卵1.5h左右剪取部分受精卵用于药物处理实验；（2）无水氯化钙的多倍体诱导有效性鉴定及诱导参数优化：设定氯化钙浓度梯度，将受精膜举起作为诱导起始时刻的形态学标记，以氯化钾处理的受精卵作为阳性对照，以不做处理的受精卵作为阴性对照，根据流式细胞仪的检测结果验证无水氯化钙的三倍体诱导有效性并对其诱导浓度进行优化；（3）中华绒螯蟹三倍体苗种的批量诱导：抱卵亲蟹标记后，利用优化的诱导参数进行整蟹的批量处理，待受精卵发育到囊胚期以后抽取部分胚胎样品用流式细胞仪的检测，以此估算整体诱导率。