[发明专利]利用高通量测序精确测定线粒体DNA高频和低频突变的方法有效
| 申请号： | 201310544351.4 | 申请日： | 2013-11-06 |
| 公开（公告）号： | CN103602735A | 公开（公告）日： | 2014-02-26 |
| 发明（设计）人： | 倪挺;朱钧;魏刚;谌婷 | 申请（专利权）人： | 复旦大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 上海正旦专利代理有限公司 31200 | 代理人： | 陆飞;盛志范 |
| 地址： | 200433 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明属于基因组学技术领域，具体为一种利用高通量测序精确测定线粒体DNA高频和低频突变的方法。本发明通过设计一组线粒体DNA特异的引物，采用滚环复制从总DNA中富集线粒体DNA，并通过特定的限制性内切酶进一步富集线粒体DNA，然后构建测序文库并进行高通量测序，并开发特定的数据分析流程，从而达到测定线粒体基因组中高频率及低频率变异的目的。其最低可检测频率低至0.3%的突变位点。 | ||
| 搜索关键词： | 利用 通量 精确 测定 线粒体 dna 高频 低频 突变 方法 | ||
【主权项】：
一种利用高通量测序精确测定线粒体DNA高频和低频突变的方法，其特征在于具体步骤如下：（1）设计线粒体DNA特异性引物SEQ ID NO.1 ‑ SEQ ID NO.38；利用高保真的滚环复制从总DNA中直接扩增线粒体DNA；（2）通过特定的限制性内切酶，进一步将扩增的线粒体DNA酶切成2条特异条带，以进一步富集线粒体DNA，这2条条带的长度加在一起为线粒体DNA的全长；（3）回收此2条条带并片段化；连接接头后进行低循环PCR或无PCR文库构建；构建的文库可以单端测序，也可以双端测序；（4）该文库经过高通量测序获得高质量数据，再经过生物信息学分析获得真核生物线粒体DNA所有位点的点突变频率和其它类型的结构变异；其最低可检测频率低至0.3%的突变位点。
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