[发明专利]高活力表达疏绵状嗜热丝胞菌脂肪酶LN的酵母工程菌株无效
| 申请号： | 201310547209.5 | 申请日： | 2013-11-06 |
| 公开（公告）号： | CN103555600A | 公开（公告）日： | 2014-02-05 |
| 发明（设计）人： | 李萌;郭晓红;李多川 | 申请（专利权）人： | 山东农业大学 |
| 主分类号： | C12N1/19 | 分类号： | C12N1/19;C12R1/84;C12R1/645 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 271018 *** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本研究利用定向进化的方法对疏绵状嗜热丝孢菌（Thermomyces lanuginosus）脂肪酶LN进行分子改造。采用易错PCR方法，建立了含有12357个转化子的突变体库。以高活力为筛选压力，通过三丁酸甘油酯平板透明圈法、G418平板、小量发酵筛选和大量发酵测酶活，最后筛选出一株正向突变菌株，对此工程菌进行发酵，通过硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose阴离子交换柱层析等步骤纯化了突变蛋白并测定酶活，结果其酶活是野生菌株所产酶活力的3.4倍。对此突变基因进行测得的序列，并与野生基因比较，有4个碱基位点发生变化，其中两个位点引起氨基酸的变化，它们是A96V，Q132R。将这株定点突变工程菌株最终命名为GS-TA-LN4。 | ||
| 搜索关键词： | 活力 表达 疏绵状嗜热丝胞菌 脂肪酶 ln 酵母 工程 菌株 | ||
【主权项】：
一种酶活提高的疏绵状嗜热丝胞菌Thermomyces lanuginosus脂肪酶LN突变毕赤酵母工程菌株，其特征是该菌为一种毕赤酵母，以野生工程菌GS‑TA‑LN为出发菌，采用定向进化和高通量筛选方法，获得一株是野生菌株所产脂肪酶酶活力的3.4倍的突变菌株；测序与野生基因比较，有4个碱基位点发生变化，其中两个位点引起氨基酸的变化，它们是A96V，Q132R，最终将此突变工程菌株命名为GS‑TA‑LN4。
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