[发明专利]一种基于磁珠快速检测PP65的方法

摘要

本发明公开了一种基于磁珠快速检测PP65的方法，属于分子生物学领域。本发明应用免疫荧光技术检测HCMV PP65抗原，利用与PP65具有特异性的适配子，构建磁珠-适配子-抗原-单克隆抗体复合体，并优化相关试剂体系及建立相应操作流程，提高了PP65检验效率。针对传统检测方法检测时间长、受临床应用限制、检测费用高等问题，采用磁珠快速检测PP65，能在早期预测HCMV病。本发明具有流程少、操作简单、检测时间短、便于普及等优点，可为自动化检验提供理论及实践基础。

主权项

一种基于磁珠快速检测PP65的方法，包括以下步骤：（1）在离心管中加入0.5～1μL的羧基修饰磁珠，MES清洗三次，加入80～100μL0.5g/L的EDC，37℃活化2～4小时；（2）直接加入2～5μM HEX红色荧光标记的与人巨细胞病毒PP65抗原具有特异性的适配子，室温轻轻震荡孵育4～6小时，磁分离后弃上清，Washing buffer清洗三次；所述适配子为SEQ ID No.1～SEQ ID No.6的序列之一；（3）用0.1～0.3%的BSA80～120μL37℃封闭过夜，Washing buffer清洗三次；（4）磁分离后弃上清，加入待检样品，室温轻轻震荡孵育10～14小时；（5）磁分离后弃上清，Washing buffer清洗三次，加入8～12ng的用Binding buffer配置的FITC绿色荧光标记的PP65单克隆抗体，室温孵育6～10小时；（6）磁分离后弃上清，Washing buffer清洗三次，加入30～70μL的Binding buffer，荧光显微镜下观察；如果待检样品中有PP65抗原，则在显微镜下既能看到红色荧光又能看到绿色荧光；如果待检样品中没有PP65抗原，则在显微镜下只能看到红色荧光，不能看到绿色荧光。