[发明专利]人类胎儿视网膜色素上皮细胞的分离培养方法有效
| 申请号： | 201310552005.0 | 申请日： | 2013-11-11 |
| 公开（公告）号： | CN103602631A | 公开（公告）日： | 2014-02-26 |
| 发明（设计）人： | 范国平;薛志刚 | 申请（专利权）人： | 苏州瑞奇生物医药科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/073 | 分类号： | C12N5/073 |
| 代理公司： | 南京纵横知识产权代理有限公司 32224 | 代理人： | 董建林 |
| 地址： | 215101 江苏省苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明提供一种人类胎儿视网膜色素上皮细胞的分离培养方法，涉及了利用机械方法分离出fRPE细胞，并进行体外培养。本发明提供的人类胎儿视网膜色素上皮细胞的分离培养方法为体外培养、扩增RPE细胞，治疗AMD等RPE损伤疾病提供了新来源。 | ||
| 搜索关键词： | 人类 胎儿 视网膜 色素 上皮细胞 分离 培养 方法 | ||
【主权项】：
一种人类胎儿视网膜色素上皮细胞的分离培养方法，其特征在于，具体步骤包括：（1）取流产胎儿的眼球，用加有P/S的PBS缓冲液清洗眼球2次，每次5 min；（2）将步骤（1）中的眼球分离角膜和虹膜，去除晶状体和玻璃体，将眼后视杯剪切为4部分，使眼杯平铺；（3）从脉络膜层揭下视网膜色素上皮细胞（RPE）层，并将RPE层转移到2 mL 0.25%TE缓冲液中，在37℃下消化10min；（4）用移液器轻轻吹打步骤（3）中所述的的RPE层，将RPE层吹散；（5）在步骤（4）中所述的RPE层中加入4 mL RPE培养基，1000 rpm离心5 min，弃上清再用2 mL RPE培养基重悬，然后接种到层粘连蛋白包被的六孔板的一个孔中；（6）培养过夜，第二天换液，每周换液两次，直到细胞达到覆盖80～90%时传代。
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