[发明专利]亨廷顿蛋白的磷酸化修饰方法有效
| 申请号： | 201310555345.9 | 申请日： | 2013-11-11 |
| 公开（公告）号： | CN103601799A | 公开（公告）日： | 2014-02-26 |
| 发明（设计）人： | 王喆明 | 申请（专利权）人： | 杭州拜善晟生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/47 | 分类号： | C07K14/47;C07K1/107;C12N15/70 |
| 代理公司： | 杭州华知专利事务所 33235 | 代理人： | 张德宝 |
| 地址： | 311121 浙江省杭*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种亨廷顿蛋白的磷酸化修饰方法，包括以下步骤：（1）、获取重组蛋白Htt（1-90）：a、亨廷顿蛋白基因的获得；b、重组表达质粒pTWIN1-htt的构建；c、表达亨廷顿蛋白的重组大肠杆菌菌株DH5α-htt的构建；d、重组蛋白的表达；（2）、重组蛋白Htt（1-90）的纯化；（3）、SPPS方法获得磷酸化修饰的Htt（Cys-K92-K158）多肽；（4）Htt（Cys-K92-K158）多肽的纯化；（5）Htt（Cys-K92-K158）多肽与重组蛋白Htt（1-90）经过偶联获得经磷酸化修饰目的蛋白Htt（1-158）；（6）经磷酸化修饰目的蛋白Htt（1-158）的纯化。经磷酸化修饰后的亨廷顿蛋白的凝聚性降低，凝聚时间、凝聚后的长度和高度都有所改善，明显延缓了蛋白质的凝聚性，很好的阻碍了亨廷顿蛋白对神经细胞的毒副作用。 | ||
| 搜索关键词： | 亨廷顿 蛋白 磷酸化 修饰 方法 | ||
【主权项】：
一种亨廷顿蛋白的磷酸化修饰方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）、获取重组蛋白Htt（1‑90）：a、亨廷顿蛋白基因的获得；b、重组表达质粒pTWIN1‑htt的构建；c、表达亨廷顿蛋白的重组大肠杆菌菌株DH5α‑htt的构建；d、重组蛋白的表达；（2）、重组蛋白Htt（1‑90）的纯化；（3）、SPPS方法获得磷酸化修饰的Htt（Cys‑K92‑K158）多肽；（4）Htt（Cys‑K92‑K158）多肽的纯化；（5）Htt（Cys‑K92‑K158）多肽与重组蛋白Htt（1‑90）经过偶联获得经磷酸化修饰目的蛋白Htt（1‑158）；（6）经磷酸化修饰目的蛋白Htt（1‑158）的纯化。
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