[发明专利]一种用于翘嘴鳜、斑鳜及其杂交子一代的分子鉴定方法

摘要

本发明公开了一种用于翘嘴鳜、斑鳜及其杂交子一代的分子鉴定方法，其步骤1）提取待测鳜鱼（翘嘴鳜、斑鳜及其杂交子一代）样品的基因组DNA；2）以提取的待测样品基因组DNA为模板，采用聚合酶链式反应（PCR）扩增出DNA目的片段，用于PCR的一对微卫星引物序列为引物正向序列5’ATGTAACCGTAAGTGACCTC3’，引物反向序列5’TGTTGTTCAGACGATGACGA3’；3）PCR产物用8%的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后进行银染色，拍照记录电泳结果；4）与标准酶切片段的图谱进行比对，读出待测鳜鱼样品的目的条带所处的位置，分别鉴定为翘嘴鳜、斑鳜、杂交子一代。方法易行，操作简便，弥补了形态学鉴定的不足，解决了水产养殖中杂交鳜（翘嘴鳜和斑鳜的杂交子一代）鉴定难和种质混杂的问题。

主权项

一种用于翘嘴鳜、斑鳜及其杂交子一代的分子鉴定方法，其步骤是：1)基因组DNA的提取：采集待测鳜鱼样品的鳍条或者肌肉组织，提取基因组DNA并测定其纯度和浓度，该步骤中测得DNA的A260/A280比值为1.80‑1.95；2)DNA目的片段的扩增：以步骤1)提取的待测样品基因组DNA为模板，采用聚合酶链式反应(PCR)扩增出DNA目的片段，用于PCR的一对微卫星引物序列为：引物正向序列：5’ATGTAACCGTAAGTGACCTC3’,引物反向序列：5’TGTTGTTCAGACGATGACGA3’；3)PCR产物的电泳及银染色鉴定：对PCR产物用8％的非变性聚丙烯酰胺凝胶进行电泳分离，常规银染法染色后，拍照记录电泳结果；4)与标准图谱进行对比：与标准酶切片段比对，读出翘嘴鳜、斑鳜及其杂交子一代的目的条带所处的位置，样品在标准酶切片段的105bp位置扩增出1条特异性DNA条带，鉴定为翘嘴鳜；样品在标准酶切片段的120bp位置扩增出1条特异性DNA条带，鉴定为斑鳜；样品在标准酶切片段的105bp位置和120bp位置各扩增出1条特异性DNA条带，鉴定为翘嘴鳜和斑鳜的杂交子一代；所述1)步骤中测得DNA的浓度范围为579.3‑3122.9ng/μl；所述2)步骤中PCR反应体系为：所述2)步骤中PCR反应程序为：94℃预变性4min，然后按以下条件进行35个循环：94℃变性30s，55℃退火45s，72℃延伸1min，循环结束后再72℃延伸10min，反应结束后于4℃中保存。