[发明专利]一种用于再生处理细胞和病毒培养用微载体的方法

摘要

本发明涉及一种细胞及病毒培养用微载体的再生处理方法。该方法是通过特殊处理液和合适的处理手段对已使用过的微载体即已培养过贴壁细胞的微载体进行有效的处理，使其达到与新微载体一样的培养效果。并且通过本方法处理，可使微载体反复使用4至5次，即便是第5次使用处理过的微载体，其细胞及病毒培养效果仍达到新微载体的90%以上的培养效果。所以本方法的建立不仅使微载体的利用率提高了近4倍，也使规模利用微载体培养细胞和病毒的成本得到了大幅度的降低。本发明所述的微载体再生处理方法可广泛用于处理在细胞培养中使用的其它微载体。

主权项

一种用于再生处理微载体的方法，所述方法由按以下顺序进行的步骤组成：1)微载体收集：用硅化好的玻璃瓶收集含培养用过的微载体的培养液，自然沉降15‑30分钟，弃掉上清液，保留微载体在玻璃瓶中；2)微载体碱处理：向经沉降得到的微载体中加入氢氧化钠溶液，所述氢氧化钠溶液的浓度为0.1‑1.0mol/L，微载体与加入的氢氧化钠溶液的体积比为1:1‑1:2，摇动3‑5分钟后，自然沉降15‑30分钟，弃掉上清液；3)微载体的第一次洗涤：向经沉降得到的微载体中加入洗涤液Ⅰ，所述洗涤液Ⅰ为含有0.01％‑0.05％聚山梨酯80的10‑30mmol/L、pH值7.4‑7.8磷酸盐缓冲液，微载体与加入的洗涤液I的体积比为1:2‑1:3，摇动3‑5分钟后，自然沉降15‑30分钟，弃掉上清液，并重复此项操作2次；4)微载体消化液处理：向经沉降得到的微载体中加入消化液，所述消化液以质量百分比含量计包含0.2％‑0.4％胰蛋白酶、0.02％乙二胺四乙酸二钠、0.85％氯化钠、0.01％‑0.05％聚山梨酯80，微载体与加入的消化液的体积比为1:1‑1:2，摇动3‑5分钟后，自然沉降20‑40分钟，弃掉上清液；5)微载体酸处理：向经沉降得到的微载体中加入柠檬酸溶液，所述柠檬酸溶液的浓度为0.05‑0.1mol/L，微载体与柠檬酸溶液的体积比为1:1，摇动3‑5分钟后，自然沉降15‑30分钟，弃掉上清液；6)微载体第二次洗涤：向经沉降得到的微载体中加入洗涤液Ⅱ，所述洗涤液Ⅱ为10‑30mmol/L、pH值7.4‑7.8磷酸盐缓冲液，微载体与洗涤液Ⅱ的体积比为1:2‑1:3，摇动3‑5分钟后，自然沉降20‑40分钟，弃掉上清液，重复此项操作2‑3次；7)取处理好的微载体样品在显微镜下观察及pH值测定；和8)处理好的微载体灭菌处理：将微载体进行121℃高压灭菌15‑45分钟，室温自然冷却后，置于2‑8℃的情况下保存备用。