[发明专利]一种甜瓜甜味酸味性状相关基因功能性分子标记及应用

摘要

本发明公开了一种甜瓜甜味酸味性状相关基因功能性分子标记及应用。利用Super-BAS技术，提供一种甜瓜甜味酸味性状相关基因功能性分子标记，确定了风味甜瓜甜味、酸味性状相关基因序列，并在此基础上成功开发了出一个甜味性状相关基因功能性分子标记SLAF18745-S01和三个个酸味性状相关基因功能性分子标记SLAF36334-S02、SLAF50072-S03和SLAF31212-S04，并通过甜味酸味标记辅助选择将传统的表型选择转变为直接选择基因型的应用对于甜瓜甜味、酸味性状的改良和改善具有重要的应用价值和意义。

主权项

一种甜瓜甜味酸味性状相关基因功能性分子标记的获得方法，其特征在于，所述的获得方法包括以下步骤：（1）将高糖甜瓜自交系“寿星”为母本与自交系“酸甜瓜”为父本进行杂交，得到杂种F1即“风味4号”；由杂种F1自花授粉获得F2代群体，对每个F2代单株果实的甜酸味通过仪器测量结合品尝进行鉴定，获得只酸不甜、只甜不酸、既酸又甜、既不酸又不甜4种风味；（2）通过CTAB法提取父本、母本、F1及F2代每个单株基因组DNA，分别等量混合父本、母本、只酸不甜、只甜不酸、既不酸又不甜每个单株基因组DNA，形成5个混池，分别对5个混池基因组进行酶切，每个混池各单株同一位点处的DNA片段序列，经过PCR扩增、测序，Blat比对软件进行聚类、Cap snp软件检测单核苷酸多态性，获得多态性的SLAF标签；（3）根据多态性标记与甜味、酸味性状的关联性使用比值关联法进行定位：分别计算群体既不酸又不甜的ac与甜不酸的ab之间和既不酸又不甜的ac与酸不甜的aa之间来源于不同基因型的差异比值，得到差异标记；将与甜味、酸味性状关联的差异标记通过blat软件比对，在双亲基因组上定位，根据标记物理位置提取出标记所在的基因，与Swissprot及Kegg数据库比对，得到与甜味性状、酸味性状相关的基因功能注释，挑选出处于功能基因外显子的SLAF标签；（4）根据定位的并处于外显子的一个甜味性状相关功能基因MELO3C011944T1所在的标签SLAF18745的多态性序列、3个酸味性状相关功能基因MELO3C020002T1、MELO3C025794T1、MELO3C026251T1的所在标签SLAF36334、SLAF50072、SLAF51212的多态性序列，利用Primer Primer5.0软件设计引物，以父本、母本、只甜不酸、只酸不甜、既不酸又不甜材料为材料，进行PCR扩增，发展出一个甜味性状相关基因功能性分子标记SLAF18745‑S01和三个酸味性状相关基因功能性分子标记SLAF36334‑S02、SLAF50072‑S03和SLAF31212‑S04。