[发明专利]荧光染料修饰的核苷酸及类似物的固相合成方法

摘要

荧光染料修饰的核苷酸及类似物的固相合成方法。本发明涉及荧光染料修饰的核苷酸及类似物的固相合成方法。 （I）

主权项

制备式（I）荧光染料修饰的核苷酸及类似物的固相合成方法，（I）其中取代基具有以下的含义：M是H, Na或KR1为H或OHR2为H或OHR3为C1‑C8直链烷基(CH2)nBase为具有下列结构的碱基或碱基类似物取代基：Dye为具有下列结构的荧光染料取代基团：其中取代基具有以下的含义：R4为OH, NH2， N（Me）2或N（Et）2, N（Pr）2R5为O,或NH2+, N（Me）2+或N（Et）2+, N（Pr）2+R6为H, F, Cl，Br或IR7和R8为H或CH2NH2，或者具有以下结构的取代基：R9为H，CH3或CH2CH3其特征是包括以下步骤：a．将式（II）化合物（II）Base为具有下列结构的碱基或碱基类似物取代基：用DMF溶解,再加入氢氧化钠和树脂，搅拌均匀，振荡反应；再分别用N,N’‑二甲基甲酰胺,二氯甲烷,醋酸水溶液和甲醇洗涤后，得到式（III）化合物（III）；b．将式（IV）化合物(IV)其中FMOC为芴甲氧羰基与式（III）化合物,碘化铜以及无水DMF混合，在氮气保护下, 注入无水三乙胺，在氮气的保护下，投入四(三苯基膦)钯, 反应结束后，再分别用N,N’‑二甲基甲酰胺,二氯甲烷,醋酸水溶液和甲醇洗涤后，再加入六氢吡啶的N,N’‑二甲基甲酰胺溶液，去掉芴甲氧羰基，得到式（V）化合物（V）；c．将式（VI）化合物（VI）R10和R11为H或芴甲氧羰基氨基甲基，或者具有以下结构的取代基：与式（V）混合于N,N’‑二甲基甲酰胺中，加入羟基苯并三唑， N,N'‑二异丙基碳二亚胺和DMAP4‑二甲氨基吡啶，经酰胺化反应后，再分别用N,N’‑二甲基甲酰胺,二氯甲烷,醋酸水溶液和甲醇洗涤，获得式(VII)化合物；R10和R11为芴甲氧羰基氨基甲基时，树脂洗涤后加入六氢吡啶的N,N’‑二甲基甲酰胺溶液，去掉芴甲氧羰基后获得式(VII)化合物然后加入六氢吡啶的N,N’‑二甲基甲酰胺溶液，去掉芴甲氧羰基后获得式(VII)化合物（VII）；d． 在所得的式(VII)化合物中加入盐酸，振荡后过滤，取滤液洗涤后冻干得到式(I)化合物。