[发明专利]用于孔雀石绿SPR检测的胶体金放大分子印迹膜的制备

摘要

本发明公开了一种以含有胶体金的分子印迹膜为SPR识别元件，快速检测孔雀石绿的方法，属于检测技术领域。本发明基于分子印迹与表面等离子体共振传感联用技术，首先利用粘附剂将引发剂固定在SPR芯片表面，再浸入预聚合液中热引发聚合，为了放大检测信号，在预聚合液中加入MUA修饰的胶体金，在SPR芯片表面原位合成分子印迹膜，并以此作为识别元件，通过胶体金将信号放大，建立一种新型的孔雀石绿SPR检测方法，该方法具有良好的灵敏度、特异性和稳定性。用分子印迹膜替代抗体或酶等生物材料作为传感器的识别元件，显著降低了检测成本，提高了传感器的贮存期和稳定性，在农药、兽药残留的检测应用中具有很大的潜力。

主权项

一种在SPR传感器芯片表面原位合成分子印迹薄膜的方法，其特征由以下步骤组成：(1)向含有3.3g TOAB的400ml甲苯溶液及200ml15mM的HAuCl4·4H2O水溶液的混合溶液中，缓慢滴入100ml含有655mg MUA的甲苯溶液，剧烈搅拌。再向该混合液中逐滴加入新配制的NaBH4水溶液(0.3M，100ml)，继续搅拌1h。用去离子水冲洗并分离有机相，旋蒸去除有机相溶剂，所得残留物真空干燥1天，得到的黑色固体以2℃／min的速度热处理30min至155℃。所得产物溶于50ml的甲苯中，再将其逐滴加入800ml氯仿中，过滤去除过量的MUA和TOAB，得到胶体金，在室温干燥后溶于200ml二甲基亚砜中。(2)称取20mg引发剂和2mg粘附剂溶于1mL四氢呋喃中，混和均匀。取100μL混合液滴于SPR传感器芯片表面，在匀胶台上旋涂均匀；(3)称取27mg孔雀石绿与一定比例的功能单体、交联剂溶于3.5mL含有胶体金的二甲基亚砜中，制得预聚合液；(备注：功能单体包括甲基丙烯酸、N‑异丙基丙烯酰胺、双功能单体甲基丙烯酸与N‑异丙基丙烯酰胺的摩尔比为(1：2)、双功能单体甲基丙烯酸与N‑异丙基丙烯酰胺的摩尔比为(2：1))(4)将步骤(3)配置的预聚合液超声除气5min后，通氮气除氧8min。将旋涂了引发剂的SPR芯片浸入预聚合液中，继续通氮5min，密封反应容器，于真空干燥箱中60℃聚合16h。聚合完毕后将SPR芯片浸入甲醇：冰乙酸=9：1的混合溶液中洗脱模板分子6h。