[发明专利]一种检测样品中单细胞增生李斯特菌活菌体的方法有效
| 申请号： | 201310583132.7 | 申请日： | 2013-11-19 |
| 公开（公告）号： | CN104651481B | 公开（公告）日： | 2017-01-11 |
| 发明（设计）人： | 杜美红;孙永军;刘清珺;杨寅;陈婷;陈舜琮 | 申请（专利权）人： | 北京市理化分析测试中心 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 北京润平知识产权代理有限公司11283 | 代理人： | 李婉婉,张苗 |
| 地址： | 100089 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种检测样品中单细胞增生李斯特菌活菌体的方法，该方法包括：（1）将能够特异地与单细胞增生李斯特菌活菌体结合的抗体偶联在磁球上，得到免疫磁球；所述能够特异地与单细胞增生李斯特菌活菌体结合的抗体不能与死菌体结合；（2）将免疫磁球与液体形式的待测样品进行混合，得到混合后的物料；（3）将所述混合后的物料置于分选磁场中以固定免疫磁球，并洗脱未吸附在免疫磁球上的物质，得到洗脱后的免疫磁球；（4）将吸附在免疫磁球上的物质进行提取DNA的操作，得到模板样品；（5）使用针对所述单细胞增生李斯特菌活菌体的特异性引物对模板样品进行PCR扩增，并根据PCR扩增产物中的目的片段的含量判断待测样品中的单细胞增生李斯特菌活菌体的含量。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 检测 样品 单细胞 增生 李斯特 菌体 方法 | ||
【主权项】：
一种检测样品中单细胞增生李斯特菌活菌体的方法，该方法包括：（1）将能够特异地与单细胞增生李斯特菌活菌体结合的抗体偶联在磁球上，得到免疫磁球；所述能够特异地与单细胞增生李斯特菌活菌体结合的抗体不能与死菌体结合且为编号为MC0007的California Bioscience单克隆抗体，相对于每毫克的磁球，所述抗体的用量为0.05‑2mg；（2）将免疫磁球与液体形式的待测样品进行混合，得到混合后的物料；混合的条件使得当待测样品中存在单细胞增生李斯特菌活菌体时，免疫磁球能够特异性地吸附单细胞增生李斯特菌活菌体，待测样品为食品和/或药品；（3）将所述混合后的物料置于分选磁场中以固定免疫磁球，并洗脱未吸附在免疫磁球上的物质，得到洗脱后的免疫磁球；（4）将吸附在免疫磁球上的物质进行提取DNA的操作，得到模板样品；（5）使用针对所述单细胞增生李斯特菌活菌体的特异性引物对模板样品进行PCR扩增，并根据PCR扩增产物中的目的片段的含量判断待测样品中的单细胞增生李斯特菌活菌体的含量，PCR扩增所用的引物包括如SEQ ID NO: 1所示的正向引物和如SEQ ID NO: 2所示的反向引物。
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