[发明专利]一种雷公藤红素衍生物的制备方法及其产品和应用有效

专利信息
申请号: 201310597162.3 申请日: 2013-11-21
公开(公告)号: CN103642887A 公开(公告)日: 2014-03-19
发明(设计)人: 张景红;谢深霞;叶龙飞 申请(专利权)人: 华侨大学
主分类号: C12P33/00 分类号: C12P33/00;C12P33/20;C07J63/00;A61P35/00;A61P35/02;A61P31/18;A61P1/16;A61P31/22;A61P31/16;A61P31/20;A61P25/28;A61P25/16;A61P25/14
代理公司: 泉州市文华专利代理有限公司 35205 代理人: 戴中生
地址: 362000 福*** 国省代码: 福建;35
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摘要: 发明提供一种雷公藤红素衍生物的制备方法及其产品和应用,该制备方法以雷公藤红素为微生物代谢药物,通过特殊诱导子对微生物代谢雷公藤红素,同时得到多种、高产率的基于雷公藤红素的羟基、还原或羧基化等取代修饰的雷公藤红素衍生物。本发明方法绿色环保、选择性强、产率高,能够大规模利用微生物制备雷公藤红素衍生物,且制备的雷公藤红素衍生物具有高效、低毒等特点,能够实际地用于肿瘤、病毒性疾病和神经损伤性疾病的治疗,为雷公藤红素衍生物提供了广阔的应用前景。
搜索关键词: 一种 雷公藤 衍生物 制备 方法 及其 产品 应用
【主权项】:
一种雷公藤红素衍生物的制备方法,其特征在于:包括以下步骤:步骤一:取保存于4℃、土豆斜面培养基培养的、转化菌种一支,置于25℃恒温培养箱中培养7天后,以适量无菌水将斜面上的孢子充分吹打下来,使单孢子悬液的浓度调整至107~108个/mL,既得种子孢子液;步骤二:以100mL,5mL的接种量,在土豆液体培养基上接种步骤一所得孢子液,在pH至6.0,温度30℃±1℃,振荡速度为200r/min条件下培养12h后;按0.1~4ug的接种量,加入各种不同比例的联合诱导子,继续培养12h后,再按1~10ug的接种量加入雷公藤红素,然后继续培养5天,每天检测各种雷公藤红素衍生物的含量和转化率,当产物转化率低至0.5~3%时,停止培养,过滤后收集菌丝体,然后将滤液于8000r/min,离心10min去除沉淀既得到发酵提取液;步骤三:将步骤二所得提取液过滤,滤液用等体积的乙酸乙酯萃取3遍,合并萃取液;而菌丝体则用重量比为1:3~1:10的乙酸乙酯超声提取30min,然后滤去菌丝体,所得滤液与萃取液合并,既得分离提取液,提取液浓缩至干,得到提取后残渣;步骤四:将经过步骤三处理所得的残渣,用1mg:1~10mL的比例用丙酮溶解后,采用硅胶拌样后挥干,称取20倍于样品量的硅胶,使用湿法进行填柱和上样;首先用5倍柱体积的100%石油醚将样品中低极性油类物质洗脱干净,然后依次用体积比为:5:2,2:3,2:5,0:5的石油醚:二氯甲烷的洗脱液,体积比为10:0,8:1,6:1,4:1,2:1,1:1,1:2,1:4,1:6,1:8的二氯甲烷:乙酸乙酯洗脱液,以及100%乙酸乙酯洗脱液,依次对柱子进行洗脱,TLC控制收集主馏分,最后使用旋转蒸发仪将各个馏分的流动相蒸干后,用适量色谱纯的甲醇溶解后,用0.22μm的有机膜过滤后,得到分离液;步骤五:将经过步骤四处理所得的分离液,采用高效液相半制备法分离纯化,HPLC梯度洗脱法控制收集不同的雷公藤红素衍生物洗脱液,减压蒸 去溶剂后,用甲醇结晶后所得到的化合物,即为所述的雷公藤红素衍生物。
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