[发明专利]一种检测土霉素的竞争型适配体传感器的制备方法及应用

摘要

本发明提供了一种检测食品中土霉素（OTC）的适配体传感器。本发明利用氧化石墨烯-聚苯胺（GO-PANI）和辣根过氧化物酶（HRP）作为放大策略，构建了竞争型适配体传感器用于土霉素（OTC）的超灵敏检测。在构建中，GO-PANI膜滴加到玻碳电极表面，金纳米粒子通过电化学方法沉积到电极表面。OTC连接适配体对OTC具有高的亲和力和特异性，作为捕获探针连接OTC，并同时连接HRP，形成HRP-Apt。完全抗原（OTC-BSA）作为固定抗原连接到电极表面，与后来加入的待测OTC竞争结合HRP-Apt。表面连有HRP的传感器在含HQ和H2O2的工作液中，进行电化学测量。利用电化学信号的改变即可实现对土霉素（OTC）的检测。本发明制备的竞争型适配体传感器选择性强、灵敏度高、操作简单快速，适合食品中土霉素（OTC）的检测。

主权项

一种检测土霉素（OTC）的竞争型适配体传感器，其特征在于，包括以下步骤：（1）氧化石墨烯‑聚苯胺（GO‑PANI）纳米复合物的制备：25 mg GO溶解在50 mL 浓度为1 M的H2SO4中，超声一小时，目的使氧化石墨剥离成单层的氧化石墨烯；200μL的苯胺单体溶液加入到GO溶液，超声振荡30分钟，形成稳定的氧化石墨烯和苯胺的混合液；接下来，倒入0.2281 g (NH4)2S4O8到混合液，并在20℃下反应2 h，当颜色变为绿色，GO‑PANI复合物就成功制备了；使用二次蒸馏水过滤洗涤多次后，得到的复合物在60℃干燥箱中干燥；为了准备进一步的实验，制备的GO‑PANI溶解在二甲基甲酰胺（DMF）中，并超声1 h，得到1 mg/mL的均匀悬浮物；（2）检测土霉素（OTC）的竞争型适体传感器的制备方法，步骤如下：玻碳电极（GCE）用氧化铝粉抛光处理，并用酒精和二次水洗涤多次；取20μL GO‑PANI复合物滴加到电极表面，室温下干燥；用二次水冲洗后，浸入HAuCl4 (1 mg/mL)中，进行电化学聚合，初始电压为‑0.2 V，扫描时间120 S；用二次水冲洗，干燥后，滴加完全抗原OTC‑BSA，电极在4℃下过夜保存；接下来用0.1%的BSA封闭电极；最终，加入辣根过氧化物酶标记的适配体（HRP‑Apt）和待测OTC混合物，电极上的OTC‑BSA和待测OTC竞争结合HRP‑Apt；（3）一种检测土霉素（OTC）的竞争型适配体传感器，其基本设计思路如下：以牛血清白蛋白（BSA）为载体，引入完全抗原（OTC‑BSA）固定到电极上，滴加辣根过氧化物酶标记的适配体（HRP‑Apt）和待测OTC混合液，通过适配体与OTC的特异性识别作用，一方面引入HRP作为放大策略修饰到电极上，另一方面使OTC‑BSA与待测OTC和适配体完成竞争反应。