[发明专利]山杨良种银×山1333的组织培养方法

摘要

山杨良种银×山1333的组织培养方法，它涉及一种植物的培养方法。本发明要解决现有山杨良种银×山1333植株组织培养困难、繁殖系数低、组培生根苗不健壮及移栽成活率低的问题。本发明是按以下步骤完成：一、外植体的采集和前处理；二、外植体的分化培养；三、不定芽的继代增殖培养；四、不定芽的生根培养；五、再生组培苗的炼苗；六、山杨良种银×山1333组培苗出瓶定植后得到容器苗，即得到高度为40cm～50cm的山杨良种银×山1333组培苗的容器苗。本发明应用在植物组织培养领域。

主权项

山杨良种银×山1333的组织培养方法，其特征在于山杨良种银×山1333的组织培养方法，是按以下步骤完成：一、外植体的采集和前处理：将山杨良种银×山1333植株的外植体在流水下冲洗1h～2h后，用质量浓度为70%～75%乙醇溶液对表面进行消毒10s～20s，然后用无菌水冲洗2～3遍，再用0.1%氯化汞消毒2.0min～4.0min后，用无菌水冲洗3～5遍，最后用无菌滤纸吸干无菌水，并对外植体进行处理，得到已消毒的外植体；二、外植体的分化培养：将步骤一中得到的已消毒的外植体接种到已灭菌的不定芽分化培养基中，在温度23℃～26℃、光照时间12h/d～14h/d，光强2500Lx～3500Lx和湿度70%～80%的条件下培养30d～45d，得到山杨良种银×山1333的不定芽；三、继代增殖培养：将步骤二中得到的山杨良种银×山1333不定芽接种到已灭菌的继代增殖培养基中，在温度23℃～26℃、光照时间10h/d～12h/d、光强2500Lx～3500Lx、光源为白炽日光灯和湿度70%～80%的条件下培养得到1.5cm～2.0cm高的山杨良种银×山1333不定芽；四、不定芽的生根培养：将步骤三得到1.5cm～2.0cm苗高的山杨良种银×山1333不定芽转接到已灭菌的不定芽生根培养基中，在温度23℃～26℃、光照时间12h/d～14h/d、光强2500Lx～3500Lx、光源为白炽日光灯和湿度70%～80%的条件下培养至苗高为4cm～5cm且具有3～5片叶片，即得山杨良种银×山1333再生组培苗；五、再生组培苗的炼苗：在温室内，将步骤四中得到山杨良种银×山1333再生组培苗置于温室苗床上，在环境温度20℃～25℃，湿度80%～95%，光照强度3500Lx～4500Lx的条件下进行再生组培苗的炼苗，得到山杨良种银×山1333植株；其中，所述的再生组培苗的炼苗，是按照下述步骤实现的：首先将培养瓶瓶口的覆盖物松开炼苗1d～2d，然后在培养瓶瓶口面积的1/4～1/3没有覆盖物的条件下炼苗1d～2d，最后将培养瓶瓶口的覆盖物全部去除炼苗2d～3d；六、山杨良种银×山1333组培苗出瓶定植后得到容器苗：将步骤五中得到的山杨良种银×山1333植株从培养瓶中取出，放入清水中洗净根部附着的培养基，将山杨良种银×山1333植株的根系保留1.0cm～1.5cm，用质量浓度为1.00g/L～1.25g/L多菌灵浸泡15min～20min，再用无菌水冲洗3～5遍后移栽到已消毒的育苗基质中在昼温21℃～29℃、夜温18℃～21℃、湿度80%～95%和遮光率60%～70%的条件下培养3d‑5d，然后在昼温21℃～29℃、夜温18℃～21℃、湿度80%～95%和遮光率30%～40%的条件下培养5d～10d；最后在昼温21℃～29℃、夜温18℃～21℃、湿度80%～95%和无遮光的条件下培养，待小苗成活且高 度为40cm～50cm后，即得到山杨良种银×山1333组培苗的容器苗。