[发明专利]一种从纤维堆囊菌发酵液中分离提取埃博霉素B的方法

摘要

本发明提供了一种从纤维堆囊菌发酵液中分离提取埃博霉素B的方法，属于微生物发酵制药领域。采用的技术方案为：纤维堆囊菌菌株由摇瓶培养后逐级放大，发酵纤维堆囊菌，再经大孔树脂吸附、乙酸乙酯解析、甲醇复溶，得粗品；粗品经柱层析、HPLC分析得到埃博霉素B的初步组分，再加入分子印迹聚合物特异性吸附埃博霉素B，最后经甲醇洗脱、结晶，得到埃博霉素B。本发明通过逐级发酵生产纤维堆囊菌，同时在分离提取过程中采用具备特异性靶向吸附能力的分子印迹聚合物，不仅对埃博霉素B具有很强的吸附力，而且可以很容易地将埃博霉素B萃取出来，从而降低了分离提取埃博霉素药物的生产成本，具有更广阔的工业化应用前景和经济效益。

主权项

一种从纤维堆囊菌发酵液中分离提取埃博霉素B的方法，其特征在于，包括以下步骤：1）将纤维堆囊菌菌株摇瓶培养72‑96h，将得到的摇瓶菌种液接种至一级种子罐中一级放大培养72‑96h，将得到的一级菌种液接种至二级种子罐中二级放大培养72‑96h，将得到的二级菌种液转入发酵罐中三级放大发酵培养12‑96h后，得到发酵液；2）向发酵液中加入发酵液总体积1%～5%的大孔吸附树脂，调节pH值至7.0～7.4后，继续培养100‑150h后，停止发酵；3）收集步骤2）发酵结束后的液体中的大孔吸附树脂，用大孔吸附树脂3～5倍体积的乙酸乙酯进行洗脱，收集乙酸乙酯洗脱液，浓缩，得到含有埃博霉素B的粗提物；4）将含有埃博霉素B的粗提物用甲醇溶解后，离心，将上清液经葡聚糖凝胶柱层析进行分离，用HPLC进行检测，合并含有埃博霉素B的组分，得到埃博霉素B分离液；5）向埃博霉素B分离液中加入该分离液总体积2%～5%的分子印迹聚合物，摇床处理18～30h后，用甲醇进行洗脱，收集甲醇洗脱液；6）将甲醇洗脱液浓缩后，得到浓缩液，将浓缩液低温结晶处理，析出的白色结晶即为埃博霉素B。