[发明专利]绿色荧光蛋白GFP的荧光定量检测方法

摘要

本发明公开了一种用于绿色荧光蛋白(GFP)的荧光定量检测方法。其主要特征在于：(1)光学检测系统采用了半透半反镜与光纤相结合的方法，确保了检测灵敏度，同时降低了系统复杂度；(2)激发光源采用了LED，荧光检测采用了光敏二极管，有效降低了系统体积与成本；(3)GFP定量采用了实时定标的方法，通过实时的定标模型来克服由标准品或检测系统带来的系统误差，确保了检测精度。所述的GFP荧光定量检测方法，在一个高通量荧光检测平台上实现，其主要特征在于，通过两维运动平台，实现96孔检测板中，单个孔位的定位与检测。本发明涉及的GFP荧光检测方法及系统具有灵敏度高、定量准确等特点，为基于GFP的标志物检测提供了一条简便、可靠的途径。

主权项

一种基于光纤技术的GFP荧光检测方法，具体的荧光检测光纤模块包括：聚焦透镜(1)、半透半反镜(2)、激发光路光纤(3)、接收光路光纤(4)、LED(5)、光敏二极管(6)、激发滤光片(7)、接收滤光片(8)，以及固定套筒(9)等组件。其中，LED(5)在恒流源的驱动下，发出强度稳定、特定波长的激发光，通过LED(5)与激发光路光纤(3)的直接耦合，大部分的激发光进入了光纤(3)，经过光纤(3)另外一个端面的激发滤光片(7)，滤除其它波长的杂散光，随后经过半透半反镜(2)反射到聚焦透镜(1)，最终经聚焦透镜(1)出射的激发光在预定的焦距位置处，形成了一个一定大小的激发光斑。在激发光斑的激励下，待测GFP样品受激发出的荧光，首先通过聚焦透镜(1)汇聚到半透半反镜(2)，再通过半透半反镜(2)透射到接收滤光片(8)，随后进入接收光路光纤(4)，直至最终到达光电传感器光敏二极管(6)。光敏二极管(6)上面的PN结，将光信号转换为光电流，随后经过I‑V放大电路的处理，得到微弱的电压信号，为了提高检测灵敏度，可以将原始的电压信号进一步放大到A/D转换器允许的量程范围，最终完成信号的测量。