[发明专利]一种快速有效鉴定偃麦草属Ee基因组的方法

摘要

本发明属于生物技术领域，涉及一种快速有效鉴定偃麦草属Ee基因组的方法。其方法包括如下步骤：S1.待测偃麦草属植物基因组DNA提取；S2.设计Ee基因组PCR扩增特异引物及PCR扩增；S3.将PCR扩增产物进行凝胶电泳检测及鉴定。本发明引物的应用，具有准确性高、结果稳定、不受环境条件和植物发育时期等影响的特点，可以快速、准确地鉴定多倍体偃麦草属植物是否具有Ee基因组。本发明解决以往基因组原位杂交技术、特异序列的荧光原位杂交、全基因组Southern杂交鉴定基因组方法的操作繁锁、人为因素影响大、费用高以及基因组特异RAPD片段鉴定基因组的方法易受基因组重复序列影响，稳定性不高等问题，具有操作简单、扩增产物单一、重复性高、模板DNA用量少、经济快捷。

主权项

一种快速有效鉴定偃麦草属Ee基因组的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、待测偃麦草属植物基因组DNA提取：（1）取待测偃麦草属植物幼嫩叶片3‑5g，于液氮中研磨至粉末状，放入50mL离心管中；（2）加入15mL预热至65℃的2×CTAB缓冲液，轻摇混匀，65℃水浴保温30min，其间轻轻摇匀几次；（3）加入等体积的氯仿和异戊醇混合溶剂，氯仿与异戊醇的体积比为24：1，摇匀至上清液呈乳白色，4℃、10,000g离心10min，取上清；（4）重复以上步骤，至分界面澄清；（5）加入等体积预冷异丙醇，摇匀，放入‑20℃冰箱沉淀30min；（6）勾出DNA沉淀，用70%酒精洗2‑3次，无水乙醇洗1‑2次；（7）风干后，将DNA溶于TE溶液，置于‑20℃冰箱中备用。S2、设计PCR扩增特异引物及PCR扩增：（1）偃麦草属Ee基因组PCR扩增特异引物的序列：PER1:CTACCTCCGTCCAGAAATAACT，PEF1:CTCCCTCCCTCCAGAAATAACT；（2）使用上述特异引物进行PCR扩增：PCR反应体系50μL，含10×ExTaq buffer，MgCl22mmol/L,dNTP200μmol/L，引物0.4μmol/L，ExTaq酶1.5U，100ng待测偃麦草属植物的DNA为模板，加重蒸水至终体积为50μL；（3）PCR扩增程序：94℃预变性4min；94℃变性30sec，55℃退火30sec，72℃延伸1min，共35个循环；72℃保温10min；S3、将PCR扩增产物进行凝胶电泳检测及鉴定，如果经电泳检测得到110bp的PCR扩增产物条带，则所述待测偃麦草属植物具有Ee基因组。