[发明专利]一种分级沉淀提取糜蛋白酶原的方法

摘要

本发明公开了一种用分级沉淀提取糜蛋白酶原的方法，其原理在于高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化层，降低其溶解度，使之从溶液中沉淀出来。而硫酸铵因其溶解度大，温度系数小和不易使蛋白质变性而应用最广。因此，本发明选择硫酸铵分级沉淀法对糜蛋白酶原提取工艺进行了研究、改进，使得制备糜蛋白酶原的收率提高到0.5％～0.6％。

主权项

一种分级沉淀提取糜蛋白酶原的方法，其特征在于所述提取工艺包括如下步骤：1)原料预处理胰脏洗净后，去掉脂肪、结缔组织等杂物，立即浸入预先冰冻好的硫酸溶液中，骤然冷却，零度保存；2)蛋白浸渍提取2.1)将预处理过的胰脏投入绞肉机中绞碎成胰浆，称重后积满100kg投入反应罐，加入200L冰冷硫酸置冷室中，每1～2h搅拌1次，浸渍提取24h；2.2)浸渍物用粗滤袋或二层纱布过滤，滤干后，得到滤渣86kg；再用86L冰冷硫酸重复上述过程，再进行过滤，弃滤渣，合并2次滤液共270L，加入固体硫酸铵65.34kg，使硫酸铵浓度达到40％饱和度，冷室放置，过夜；2.3)虹吸上清液，底层沉淀加入适量硅藻土作助滤剂，减压过滤，上清液和滤液合并，得提取液264L，加入固体硫酸铵54.12kg，使硫酸铵浓度达到70％饱和度，冷室放置过夜；3)分级沉淀次日上层清液弃去，底层沉淀减压过滤至干称重46.68kg，加入140L冰水使之溶解，重复用硫酸铵40％和70％饱和度分级沉淀；4)结晶4.1)取第二次70％饱和度沉淀滤饼9.6kg，加入14.4L冰水溶解，并加入4.8L饱和硫酸铵溶液，用5mol/L氢氧化钠调节PH5.0，于25℃恒温箱中静置，保温48h进行结晶；4.2)将结晶减压抽滤，干燥后得糜蛋白酶原0.55kg。