[发明专利]可用于多重检测的单链长探针的制法有效
| 申请号： | 201310644095.6 | 申请日： | 2013-12-03 |
| 公开（公告）号： | CN103614478A | 公开（公告）日： | 2014-03-05 |
| 发明（设计）人： | 徐英武;汪平;吕洪玉 | 申请（专利权）人： | 浙江农林大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 杭州中成专利事务所有限公司 33212 | 代理人： | 金祺 |
| 地址： | 311300 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种可用于多重检测的单链长探针的制法，包括：1）针对待检测的每种靶标设计下游鉴别探针；2）针对与待检测靶标无关的核酸序列，即填充物长序列的模板设计一对扩增引物，扩增引物对的上游特异性引物的5′端与步骤1）所得的下游鉴别探针的3′端相连组成上游引物，扩增引物对的下游特异性引物5′端与Tag1的3′端相连组成下游引物；3）步骤2）中所有的下游引物均相同；4）合成上游引物并在其5′端进行磷酸化标记；5）以所述与待检测靶标无关的核酸序列为模板进行不对称PCR扩增，获得磷酸化标记单链以及部分双链；6）切胶回收不对称PCR扩增产物中带磷酸化标记的单链DNA。 | ||
| 搜索关键词： | 用于 多重 检测 单链长 探针 制法 | ||
【主权项】：
可用于多重检测的单链长探针的制法，其特征在于包括以下步骤：1）、针对待检测的每种靶标的各个株系的核酸序列的保守区设计相应的探针，即设计每种靶标的下游鉴别探针；2）、针对与待检测靶标无关的核酸序列，即填充物长序列的模板设计一对扩增引物，扩增引物对的上游特异性引物的5′端与步骤1）所得的下游鉴别探针的3′端相连组成上游引物，扩增引物对的下游特异性引物5′端与Tag1的3′端相连组成下游引物；3）、步骤2）中所有的下游引物均相同；4）、合成上游引物并在其5′端进行磷酸化标记；5）、以所述与待检测靶标无关的核酸序列为模板，以磷酸化标记上游引物和未进行任何标记的下游引物进行不对称PCR扩增，获得磷酸化标记单链以及部分双链；6）、切胶回收不对称PCR扩增产物中带磷酸化标记的单链DNA，即单链长探针。
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