[发明专利]利用半胱氨酸水解酶家族成员制备(-)γ内酰胺的方法

摘要

本发明提供一组具有(+)γ内酰胺拆分活性的半胱氨酸水解酶，其来源于13个微生物种属，并且具有三个共同的保守结构域：保守结构域I：*A(V/M/R/G/T)L(V/H/I)L(V/I)L(V/I)V(N/E/D)*(H/I)DM(L/V/I)Q，保守结构域II：*S(G/D/N)*F(W/Y)*，保守结构域III：*I(F/V/M)V(A/C/M/T)G*T(A)N(E/H/D/A)*C(G/A/D/P)，其中，*代表任意氨基酸残基，括号中的氨基酸代表同一氨基酸残基位置上可能存在的氨基酸残基。本发明还提供了上述半胱氨酸水解酶的编码基因，以及上述半胱氨酸水解酶在拆分消旋体γ内酰胺方面的应用。

主权项

具有(+)γ内酰胺拆分活性的半胱氨酸水解酶，是如下(a)或(b)的蛋白质，或具有(c)所示半胱氨酸水解酶保守蛋白结构域的所有来源于微生物的半胱氨酸水解酶：(a)由序列表中的SEQ ID No：1，SEQ ID No：2，SEQ ID No：3，SEQ ID No：4，SEQ ID No：5，SEQ ID No：6，SEQ ID No：7，SEQ ID No：8，SEQ ID No：9，SEQ ID No：10，SEQ ID No：11，SEQ ID No：12或SEQ ID No：13的氨基酸残基序列组成的蛋白质；(b)将序列表中的SEQ ID No：1，SEQ ID No：2，SEQ ID No：3，SEQ ID No：4，SEQ ID No：5，SEQ ID No：6，SEQ ID No：7，SEQ ID No：8，SEQ ID No：9，SEQ ID No：10，SEQ ID No：11，SEQ ID No：12或SEQ ID No：13氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有(2S,3R)‑γ‑内酰胺拆分活性的衍生蛋白质；(c)半胱氨酸水解酶蛋白序列的三个保守结构域：保守结构域I：****A(V/M/R/G/T)L(V/H/I)L(V/I)L(V/I)V(H/I)DM(L/V/I)Q(N/E/D)****，保守结构域II：****S(G/D/N)*F(W/Y)****，保守结构域III：*I(F/V/M)V(A/C/M/T)G**T(A)N(E/H/D/A)*C(G/A/D/P)，其中*代表任意氨基酸残基，括号中的氨基酸代表同一氨基酸残基位置上可能存在的氨基酸残基，例如A(V/M/R/G/T)代表A残基的位置可能被V/M/R/G/T氨基酸残基取代。