[发明专利]一种测定交联透明质酸钠凝胶中聚乙二醇残留量的方法

摘要

发明公开了一种交联透明质酸钠凝胶中聚乙二醇残留量的检测方法，依据PEG与钡离子和碘离子形成1∶1∶1的复合物的光密度与PEG的含量在535nm处呈线性关系的原理采用非常规溶剂建立了一种操作简单、快速、稳定性好的交联凝胶中微量PEG残留量的检测方法。该检测方法在0-50.0µg/mL范围内具有良好的线性关系，尤其可用于残留量在2µg/mL以下的和大分子量的交联剂检测。本检测方法不仅可用于PEG交联的透明质酸钠凝胶中PEG残留量的痕量检测和凝胶产品的质量控制，对PEG交联的其它凝胶及含有PEG的其它液态样品中PEG残留量的检测也有重要意义。

主权项

一种测定交联透明质酸钠凝胶中聚乙二醇残留量的方法，包括以下工艺步骤：（1）样品预处理交联透明质酸钠凝胶的样品预处理：将PEG交联的透明质酸钠凝胶用7‑14倍体积的95%乙醇或无水乙醇醇沉多次，对所得沉淀干燥并粉碎，将部分粉碎后的颗粒或粉末在108‑124℃下复溶10‑30min，精密称取复溶后的凝胶1.0g，加入2 mL无水乙醇，密封，经漩涡振荡器振荡，使凝胶沉淀，然后于5000‑18000r/min离心3‑30min，取上清液待测；非交联透明质酸钠凝胶的样品预处理：将非交联透明质酸钠凝胶用7‑14倍体积的95%乙醇或无水乙醇醇沉多次，对所得沉淀干燥并粉碎，将粉碎后的颗粒或粉末在108‑124℃复溶10‑30min，精密称取复溶后的全部凝胶于1000mL烧杯内，加入2 倍体积（g:mL）无水乙醇，用玻璃棒搅拌使凝胶沉淀，然后将上清液分装于100mL离心管中在5000‑18000r/min离心3‑30min，取上清液备用； （2）PEG标准溶液的配制PEG600‑20000标准贮存液：精密称取50mg的PEG600‑20000，加入非交联透明质酸钠凝胶样品经预处理所制得的上清液中溶解，在100mL容量瓶中定容，于4℃冰箱保存备用；PEG600‑20000标准工作液：吸取PEG600‑20000标准贮存液5mL于50mL容量瓶中，用非交联透明质酸钠凝胶样品经预处理所制得的上清液定容，质量浓度为50µg/mL；  （3）氯化钡溶液的配制     精确称取5g氯化钡, 加蒸馏水定容至100ml，得到5%的氯化钡溶液；     （4）碘液的配制     精确称取碘化钾2.0g和碘1.3g，加蒸馏水定容至100ml，得到0.05mol/L的碘液；  （5）PEG溶液标准曲线的制作分别取6‑15组具有不同浓度为0、0.5、10.5、20.5、30.5、40.5 µg/mL的PEG标准溶液1.0ml，浓度范围在0‑50μg/ml之间，加入5ml蒸馏水，5%的氯化钡溶液和碘液各50‑1000μl，反应8‑15min，于波长535nm处测定光密度值；每个浓度做三个平行样；以上加量可按比例增减；根据每组PEG浓度与测得的光密度值之间的关系，以PEG浓度为横坐标，光密度值为纵坐标，绘制标准曲线；（6）交联透明质酸钠凝胶中PEG残留量的计算本发明的用于计算交联透明质酸钠凝胶中PEG残留量的计算公式如下：Y=0.0108X+0.2047（R2=0.9994）式中：X——PEG的质量浓度（μg/ml）；Y——碘‑氯化钡‑PEG（1:1:1）复合物在535nm处的光密度值；     （7）交联透明质酸钠凝胶中PEG残留量的测定方法步骤     按步骤（5），取步骤（1）交联透明质酸凝胶样品预处理中所得的上清液适量加入一定量的蒸馏水、氯化钡溶液和碘液反应，反应时间为15min以内，于波长535nm处测定光密度值，根据步骤（5）制作的PEG浓度与相应光密度值之间的标准对应关系曲线或按步骤（6）的计算公式确定待测交联透明质酸钠凝胶中PEG残留量。