[发明专利]乙偶姻高耐受性菌株的选育和用该菌株发酵生产乙偶姻

摘要

发明阐述了乙偶姻高耐受性菌株的选育和用该菌株发酵生产乙偶姻，属于生物工程技术领域(微生物领域)。本发明包括如下过程：(1)亚硝基胍诱变：将本实验室筛选并保藏的解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens FMME044作为出发菌株制备菌悬液，并将其与不同浓度的亚硝基胍反应，一段时间后，终止反应再进行后培养。(2)驯化：在驯化培养基里添加不同浓度的乙偶姻，制成不同浓度的乙偶姻发酵液，逐步提高乙偶姻浓度进行驯化培养。将上述驯化所得的菌悬液直接涂布到含高浓度乙偶姻的平板上。(3)筛选：在高浓度乙偶姻平板上能够长出的单菌落即为能耐高浓度乙偶姻的菌株。然后，挑取单菌落进行发酵验证并将高产菌株进行二次验证，筛选出一株比出发菌株产更高浓度乙偶姻的菌株，命名为B.amyloliquefaciens E-11。本发明同时公开一种采用该菌株生产乙偶姻的方法，采用本方法发酵40h乙偶姻产量为63g/L。

主权项

乙偶姻高耐受性解淀粉芽孢杆菌的选育，包括以下步骤：(1)亚硝基胍诱变将本实验室筛选并保藏的解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens FMME044作为出发菌株制备菌悬液，并将其与不同浓度的亚硝基胍反应，一段时间后，终止反应再进行后培养；(2)驯化在驯化培养基里添加不同浓度的乙偶姻，制成不同浓度的乙偶姻发酵液，将上述后培养的菌悬液添加到含有低浓度乙偶姻的培养基中，培养一段时间后再转接到相同乙偶姻浓度的培养基中，每个浓度转接三次之后，再转接到含有相对高浓度乙偶姻的培养基中，重复此操作，直到培养基中乙偶姻浓度达到80g/L；将上述驯化所得的菌悬液直接涂布到含高浓度乙偶姻的平板上；(3)筛选在高浓度乙偶姻平板上能够长出的单菌落即为能耐高浓度乙偶姻的菌株；然后，挑取单菌落进行发酵验证并将高产菌株进行二次验证，筛选出35株比出发菌株高产且能耐受高浓度乙偶姻的菌株，其中菌株E‑11生产乙偶姻的能力最强。