[发明专利]山羊骨骼肌卫星细胞体外培养方法

摘要

本发明涉及生物技术领域，特别是一种山羊骨骼肌卫星细胞的体外培养方法，包括如下步骤：（1）取样；（2）消化；（3）过滤；（4）初代培养；（5）诱导培养。本发明方法可快速通过体外培养获得山羊骨骼肌卫星细胞，所培养的细胞形态均一，繁殖活力强，在分化诱导后具有融合成肌管得能力。本发明山羊肌卫星细胞的体外培养方法不但操作简便，而且大大节省了培养成本，具有一定的经济意义，且可以获得大量传代稳定性好的细胞；山羊肌卫星细胞的体外培养可以为探索肌肉分化途径的分子机制及改善肌肉性状的转基因动物生产提供丰富的细胞来源，具有一定的理论和应用价值。

主权项

山羊骨骼肌卫星细胞体外培养方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）取样：在无菌条件下，取山羊背最长肌放入冰盒，立即带回实验室；（2）消化：将肉样用剪刀剪碎，加入含有胰酶和Ⅰ型胶原酶的D‑Hanks液，37℃条件下消化60～120min，得到细胞悬浮液；（3）过滤：过滤细胞悬液，然后离心，所得细胞沉淀用D‑Hanks 液重悬并离心，再用细胞生长培养液重悬细胞；（4）初代培养：将悬浮的细胞接种于以多聚赖氨酸包被的细胞培养瓶中，采用差速贴壁法培养细胞pp1至pp6，将pp6中的细胞培养至汇合率为95%，然后采用质量浓度为0.25%的胰酶进行传代，即完成山羊肌卫星细胞的体外分离培养；（5）诱导分化。