[发明专利]一种锦紫苏类病毒快速检测方法

摘要

一种锦紫苏类病毒病毒的快速检测方法，其特征在于：包括锦紫苏类病毒RNA的提取、RT-PCR反应和PCR产物的核酸胶体金层析试纸条检测等步骤。本发明是在优化锦紫苏类病毒RNA的提取方法的前提下，将RT-PCR技术与核酸胶体金免疫层析技术相结合，建立的适用于锦紫苏类病毒的快速检测方法。其最大的特点是首先简化了RNA的提取过程，直接用超纯水稀释后可进行RT-PCR检测。其次，与核酸胶体金层析试纸条在10分钟内即可完成PCR产物的检测，不需要电泳和溴化乙锭的染色，更为快速实用，且安全无污染。在实际生产中快速检查带病毒植物体，一旦发现被感染的材料就应该立即淘汰或连根拔除，挽回了巨大的经济损失。

主权项

一种锦紫苏类病毒快速检测方法，其特征在于：包括锦紫苏类病毒RNA的提取、RT‑PCR反应和PCR产物的核酸胶体金层析试纸条检测步骤，具体如下： (1)用移液枪从新鲜的锦紫苏植物茎干或者叶片中吸取汁液，置于干净灭菌EP管中；在EP管中加入超纯水稀释吸取的汁液样品； (2)取一定量稀释后的汁液，并加入NTPs、5×M‑MLV缓冲液、R‑primer、M‑MLV逆转录酶、RNasin、ddH2O等进行反转录； (3)以反转录产物为模板，加入待测锦紫苏类病毒的通用引物反向引物R‑primer、正向引物F‑primer、2×Taq PCR MasterMix、ddH2O进行PCR扩增，所述正向引物，反向引物分别标记了地高辛、荧光素； (4)采用常规方法制备胶体金溶液、胶体金‑兔抗地高辛多克隆抗体结合物、层析试纸条，在检测点加入荧光素单克隆抗体，在质控点加入羊抗兔多克隆抗体； (5)将步骤(3)中所得PCR产物与胶体金‑兔抗地高辛多克隆抗体结合物混合后插入试纸条，如果检测点和质控点均显色则为锦紫苏类病毒阳性结果，仅质控点显色则为阴性结果。