[发明专利]一种团头鲂肌间骨总RNA提取方法有效
| 申请号： | 201310673534.6 | 申请日： | 2013-12-11 |
| 公开（公告）号： | CN103642797A | 公开（公告）日： | 2014-03-19 |
| 发明（设计）人： | 高泽霞;万世明;易少奎;钟嘉;王卫民 | 申请（专利权）人： | 华中农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 武汉宇晨专利事务所 42001 | 代理人： | 王敏锋 |
| 地址： | 430000 *** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种提取团头鲂肌间骨总RNA的方法，其步骤：1）以团头鲂为材料：取其肌间骨置于灭菌预冷的研钵中，研磨，至肌间骨研磨至粉末状后转入离心管中，加Trizol摇匀，室温放置；2）4℃，离心，取上清液，加入1/5体积的氯仿，摇晃，充分乳化为无分层的均匀白色乳液，室温放置；3）4℃，离心，取上清液用氯仿重复抽提；4）取上清液，加入等体积的异丙醇、柠檬酸钠、氯化钠混匀，-20℃静置；5）静置后，4℃，离心，弃上清液留沉淀，加DEPC水配置的乙醇，震荡，重复洗涤沉淀；6）4℃，离心，弃上清液留沉淀，自然晾干，加DEPC水溶解RNA，得总RNA溶液。过程简单，成本低，获得总RNA浓度高、纯度高、完整性好，满足进一步分子生物学研究。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 团头鲂肌间骨总 rna 提取 方法 | ||
【主权项】：
一种团头鲂肌间骨总RNA提取方法，其步骤是：1）以团头鲂为材料：取其肌间骨置于灭菌预冷的研钵中，后边加液氮边研磨，至肌间骨研磨至粉末状后转入2ml离心管中，每50mg肌间骨粉末加1mlTrizol，摇匀，室温放置4－6min；2）4℃，12000rpm离心4－6min，取上清液，加入1/5体积的氯仿，摇晃15sec，充分乳化为无分层的均匀白色乳液，室温放置4－6min；3）4℃，12000rpm离心15min，取上清液用氯仿重复抽提1－2次；4）取上清液，加入等体积的异丙醇、200μl0. 8mol/L柠檬酸钠、200μl1. 2mol/L氯化钠，充分混匀，‑20℃静置3－5小时；5）静置过后，4℃，12000rpm离心10min，弃上清液留沉淀，加DEPC水配置的75%体积比乙醇，温和震荡，重复洗涤沉淀1－3次；6）4℃，7500rpm离心4－6min，弃上清液留沉淀，自然晾干，加30μlDEPC水溶解RNA，得总RNA溶液。
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